权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

ADPリボシル化酵素PARP7による自然免疫制御の分子構造基盤

ADP-核糖基化酶 PARP7 调节先天免疫的分子结构基础

基本信息

批准号：
22K06109
负责人：
山下征輔
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06109/
关键词：
ADPリボシル化酵素構造生物学 ADPリボシル化

项目摘要

当該年度においては主にヌクレオチド転移酵素TUT1とU6 snRNAの複合体結晶構造解析および生化学解析に取り組んだ。U6 snRNAはスプライシング反応の触媒活性を担う、真核生物の遺伝子発現に不可欠の因子である。U6 snRNAは成熟過程において様々な修飾を受けることが知られており、ヌクレオチド転移因子TUT1による3'末端のオリゴウリジル化はその一つである。3'末端のウリジン配列はRNA結合タンパク質Lsmの結合部位としてU4/U6 di-snRNPの形成を促進する。私たちはこれまでにヒトTUT1の単体およびヌクレオチドとの複合体構造を明らかにし、ヌクレオチドの認識機構を明らかにしてきたが、U6 snRNAとの詳細な結合様式については不明な点が多かった。そこで私たちはヒトTUT1とU6 snRNAの複合体のX線結晶構造解析に取り組み、様々なコンストラクトや結晶化条件を検討してきた。その結果、最終的にC末端側を欠損させたヒトTUT1と、U6 snRNAのうちウリジル化反応に必要な領域からなるコンストラクトの組み合わせにおいて結晶化・構造決定に成功した。複合体構造中でTUT1は複数のドメインを協働的に利用することによってU6 snRNAの複数の特徴を認識し、高い特異性・親和性で3'末端へのウリジル化反応を行うことがわかった。また、立体構造と生化学解析を合わせて、決まった数だけのウリジンを付加させたあとに反応を終結させるメカニズムがあることも明らかにした。これらの結果をまとめ、現在論文投稿中である。

During the year, the major enzyme transfer enzyme TUT1 U6 snRNA complex was analyzed, and biochemical analysis was performed. U6 snRNA is sensitive to the activity of the catalyst, and the eukaryotes are responsible for the presence of an important factor. The mature process of U6 snRNA requires that you know how to change the transfer factor of TUT1 in the end. 3'at the end of the device, the combination of the RNA, the Lsm, the joint of the U4/U6 di-snRNP, the promoter, the promoter. In this case, we use the combination of TUT1 and U6 snRNA devices to create a multi-sensor system with unknown data points. In this paper, we analyze the X-ray crystal structure of the TUT1 U6 snRNA complex and analyze the crystallization conditions of the complex. The result of the experiment, the most accurate result of the C terminal is not valid, and the U6 snRNA terminal is sensitive to the necessary domain information. The results show that the crystallization of the system determines the success of the decision. In the construction of the complex, the TUT1 complex is in the process of making use of the complex, U6 snRNA, special knowledge, high specificity, and sex in the construction of the complex. The chemical analysis of biochemistry is based on the analysis of biochemistry. I don't know how to do the biochemical analysis. The results show that the results are satisfactory, and we are now in the process of submitting articles.