Neuropeptide regulation of organogenesis through cell surface FoF1-ATP synthase

神经肽通过细胞表面 FoF1-ATP 合酶调节器官发生

• 批准号: 22K06241
• 负责人: 西脇 清二
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Kwansei Gakuin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06241/
• 关键词: FoF1-ATP synthase; FLP-10; DTC移動; A-Team; ATP濃度; 神経ペプチド; 器官形成; ATP合成酵素; 線虫

１．DTC細胞表面にFoF1-ATP synthaseが発現しているのかを解析するために、alphaおよびbetaサブユニットとVenus融合遺伝子を作製し、細胞膜マーカーであるPLC-SH-mCherryと同時にDTC特異的プロモーターで発現させた。その結果、alpha, betaサブユニットがDTC細胞膜で発現することを確認した。２．FoF1-ATP synthaseを介して体腔中のATP量は制御されているのかを解析するため、FoF1-ATP synthaseの触媒サブユニットbetaについて、枯草菌や大腸菌で明らかになっている活性部位に相当するアミノ酸置換を行った。その結果、betaサブユニットのアミノ酸置換によって、過剰発現によるDTC移動異常が有意に弱くなることを確認した。３．in vivoでATP濃度を測定できるFRETセンサーであるA-TeamをDTC特異的にGPIアンカー型として細胞外に発現したところ、野生型に比べてflp-10変異体で有意にFRETが高くなることを明らかにした。４．FoF1-ATP synthase複合体alphaあるいはbetaサブユニットをDTC特異的に発現すると、flp-10変異体と同様のDTC移動異常が現れるが、これらのサブユニットのloss-of-functionの表現型は不明である。そこでDTC特異的なRNAi実験を行うことを目的として、RNAi耐性をもつrde-4変異体で、DTC特異的にrde-4::gfpを発現する線虫株を作成した。５．FLP-10Cペプチドの欠損がなぜDTC移動異常を生じるのか、その下流の分子機構を解明するためにflp-10変異体の遺伝的サプレッサーの分離を行った。flp-10(tk28)株をEMS処理することにより、DTC異常が抑制されたサプレッサー株を14株分離した。この研究については変異体の分離に予想以上の時間がかかり若干遅れている。

1. FOF1-ATP synthase is found on DTC cell surface and analyzed by PLC-SH-mCherry, alpha and beta fusion proteins, and DTC-specific proteins are found on cell membrane. The results, alpha, beta, etc. of DTC cell membranes were confirmed. 2. FoF1-ATP synthase mediates ATP production in body cavity, and its catalytic activity is related to acid substitution in Bacillus subtilis and Escherichia coli. Results, beta, acid displacement, DTC movement abnormalities, intentional weakness, confirmation 3.in vivo ATP concentration determination: FRET: A-Team: DTC-specific, GPI: extracellular, wild-type, and intentionally FRET: high. 4. The expression pattern of F1-ATP synthase complex alpha and flp-10 is unknown. DTTC-specific RNAi resistance to rde-4 variants and DTC-specific rde-4::gfp was developed. 5. FLP-10C is the best choice for the future. Flp-10(tk28) strain was isolated from 14 strains by EMS treatment. This research is not about separation. It is about time.

项目成果

線虫の基底膜分子mig-6変異体の遺伝的サプレッサーの分離と解析

线虫基底膜分子mig-6突变体遗传抑制因子的分离与分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 岩﨑一樹，川野武弘，Culotti Joe;西脇清二
• 通讯作者: 西脇清二

線虫のリボソームタンパク質変異によるmig-17/ADAMTS変異体の器官形成異常の抑制

线虫核糖体蛋白突变对 mig-17/ADAMTS 突变体器官发生缺陷的抑制

• 发表时间: 2022
• 作者: 三皷海杜;柴田幸政;西脇清二
• 通讯作者: 西脇清二