Neuropeptide regulation of organogenesis through cell surface FoF1-ATP synthase

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１．DTC細胞表面にFoF1-ATP synthaseが発現しているのかを解析するために、alphaおよびbetaサブユニットとVenus融合遺伝子を作製し、細胞膜マーカーであるPLC-SH-mCherryと同時にDTC特異的プロモーターで発現させた。その結果、alpha, betaサブユニットがDTC細胞膜で発現することを確認した。２．FoF1-ATP synthaseを介して体腔中のATP量は制御されているのかを解析するため、FoF1-ATP synthaseの触媒サブユニットbetaについて、枯草菌や大腸菌で明らかになっている活性部位に相当するアミノ酸置換を行った。その結果、betaサブユニットのアミノ酸置換によって、過剰発現によるDTC移動異常が有意に弱くなることを確認した。３．in vivoでATP濃度を測定できるFRETセンサーであるA-TeamをDTC特異的にGPIアンカー型として細胞外に発現したところ、野生型に比べてflp-10変異体で有意にFRETが高くなることを明らかにした。４．FoF1-ATP synthase複合体alphaあるいはbetaサブユニットをDTC特異的に発現すると、flp-10変異体と同様のDTC移動異常が現れるが、これらのサブユニットのloss-of-functionの表現型は不明である。そこでDTC特異的なRNAi実験を行うことを目的として、RNAi耐性をもつrde-4変異体で、DTC特異的にrde-4::gfpを発現する線虫株を作成した。５．FLP-10Cペプチドの欠損がなぜDTC移動異常を生じるのか、その下流の分子機構を解明するためにflp-10変異体の遺伝的サプレッサーの分離を行った。flp-10(tk28)株をEMS処理することにより、DTC異常が抑制されたサプレッサー株を14株分離した。この研究については変異体の分離に予想以上の時間がかかり若干遅れている。