受容体型チロシン脱リン酸化酵素による軸索側枝の出芽・伸長過程の制御機構の解明

受体型酪氨酸去磷酸化酶对轴突侧枝萌发和伸长过程的控制机制的阐明

• 批准号: 22K06458
• 负责人: 安村 美里
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06458/
• 关键词: 軸索側枝形成; 皮質脊髄路; チロシン脱リン酸化酵素; 軸索側枝

神経回路形成のメカニズムのひとつに軸索側枝形成がある。神経細胞は軸索の途中に側枝を形成し、複数の標的細胞とシナプスを形成する。これにより、神経細胞は複数の神経核に同時に信号を送ることができ、協調的な活動が可能になると考えられている。様々な脳領域の神経細胞が軸索側枝を形成することが知られているが、中心的な役割を果たす鍵となる分子が同定されていないため、軸索側枝形成の分子機構は依然として不明な点が多い。本研究では皮質脊髄路の神経軸索が橋核に伸ばす側枝をモデルとし、軸索側枝形成を経時的に観察する方法を確立し、申請者らがこれまでの研究から軸索側枝形成の鍵分子であることを見出した受容体型チロシン脱リン酸化酵素(RPTP)の細胞外領域に結合する軸索側枝誘導分子や、下流で働くシグナル経路を同定することで、軸索側枝形成を制御する分子機構を明らかにすることを目的としている。今年度は、軸索側枝形成を経時的に観察する方法の準備と、軸索側枝形成を制御するために必要なRPTPのドメインの同定を行なった。皮質脊髄路起始細胞特異的に赤色蛍光タンパク質tdTomatoを発現するマウスの生後2日目の脳をSeeDB2法で透明化し、Lightsheet顕微鏡を用いて皮質脊髄路の3次元画像を取得した。皮質脊髄路全体が含まれる脳スライスを作製するための位置や角度を決定するために、得られた画像を現在解析している。RPTPは細胞外領域に2つの分子間相互作用に関わるドメインを持ち、細胞内領域にフォスファターゼドメインを持つ。RPTPをノックダウンするためのshRNAベクターとドメイン欠損型のRPTP発現ベクターを皮質脊髄路起始細胞に導入し、軸索側枝形成に与える影響を検証した。

The Shinto circuit forms <s:1> メカニズム, ひと, に, に, and axonal lateral branches form がある. The に lateral branches を of the する axis of the Shinto cells form a を, and the multiple band-labeled cells とシナプスを form a する. こ れ に よ り, god 経 cells は plural の 経 nuclear に を に signals at the same time send る こ と が で き, coordinate activities な が may に な る と exam え ら れ て い る. Others 々 な 脳 field の god 経 cells が axon collateral を form す る こ と が know ら れ て い る が, cut を な service in the center of the fruit た す key と な が る molecules with fixed さ れ て い な い た め, axon collateral formation の molecular institutions は still と し て が い more unknown な point. This study で は cortical spinal marrow road の god 経 axon が bridge nuclear に stretch ば す collateral を モ デ ル と し, axon collateral formation を 経 when に 観 examine す を る method establishing し, applicants ら が こ れ ま で の research か ら axon collateral formation の key molecular で あ る こ と を shows し た by capacity size チ ロ シ ン リ off ン acidification enzyme (RPTP) の extracellular domain に す る axis Cable collateral induced molecular や, obscene で 働 く シ グ ナ ル を 経 road with fixed す る こ と で, axon collateral formation を suppression す る molecular institutions を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. Our は, axon collateral formation を 経 when に 観 examine す る と の prepare, axon collateral formation を suppression す る た め に necessary な RPTP の ド メ イ ン の with fixed line を な っ た. Cortical spinal marrow road starting cell specific に red light 蛍 タ ン パ ク qualitative tdTomato を 発 now す る マ ウ ス の postnatal 2 orders の 脳 を SeeDB2 で transparent し, Lightsheet 顕 micromirror を with い て の cortical spinal marrow road 3 dimensional portrait を obtain し た. Cortical spinal marrow road contains all the が ま れ る 脳 ス ラ イ ス を cropping す る た め の position や Angle を decided す る た め に, ら れ た portrait を now parse し て い る. RPTP は extracellular domain に 2 つ の intermolecular interactions に masato わ る ド メ イ ン を hold ち, intracellular domain に フ ォ ス フ ァ タ ー ゼ ド メ イ ン を つ. RPTP を ノ ッ ク ダ ウ ン す る た め の shRNA ベ ク タ ー と ド メ イ ン owe damage type の RPTP 発 now ベ ク タ ー を cortical spinal marrow road starting cells に import し, axon collateral formation に and え る influence を 検 card し た.