Analysis of SECIS regulatory mechanism by noncoding RNA

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本年度は、Selenoprotein P(SeP)のSECIS配列に相補的な配列を持つ新規noncoding RNA L-ISTによるSeP mRNAからタンパク質への翻訳阻害に必要な領域の同定を進めた。我々のこれまでの研究から、L-ISTによるSeP翻訳抑制には、相補的な領域だけでなく、5'側、3'側の日相動性配列部分も必要であることが明らかになっている。この情報をもとに、5'領域と3'領域の部分欠損変異体を作成し、SePを発現しているHepG2細胞にトランスフェクションを行った。その結果、5'非相補配列領域では、5'末端から500塩基まで欠損させたL-ISTでは翻訳抑制効果が見られたのに対し、600塩基まで欠損させると翻訳抑制が見られなくなった。500～600塩基のみを欠損させた変異体においても、翻訳抑制効果が見られなかったことから、5'非相補的領域内の必要領域は500～600塩基の間にあることが明らかになった。次に、3'非相補的配列領域でも同様の解析を行った。その結果、3'末端から500塩基までの欠損では翻訳抑制が起こったが、600塩基まで欠損させた変異体では、抑制が起こらなかった。これらのデータから、3'非相動性領域も末端部から500塩基から600塩基の間に必要配列があると推定された。long noncoding RNAによる翻訳抑制作用には、alu配列やSINB2配列のようなリピート配列が必要になることが多いことが知られているため、同定された必要領域内に繰り返し配列や機能性ドメインが存在するか確認を行ったが、5'領域、3'領域ともに、典型的な繰り返し配列や機能性ドメインは存在していないことがわかった。現在、詳細な必要配列の同定を進めている。