Development of a rational screening method for highly efficient search for neurotrophic compounds

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BSTと PC12 細胞に対する活性にどの程度の相関性があるのか再検討した。77種類ミャンマー産植物ライブラリーのうち、BSTに活性を示したのは20サンプル、活性がなかったものは57サンプルであった。活性を示した20サンプルのうち、16サンプルがPC12細胞にて活性が認められた。すなわち、BSTでピックアップできたサンプルの80％がPC12細胞に活性を示したことになる。一方、BSTに活性のなかった57サンプルのうち40サンプルでPC12細胞に活性が認められなかった。つまり、BST活性のなかったサンプルの約70%がPC12細胞に対して活性を示さないことがわかった。ブラインシュリンプの動きを追跡できるトラッキングシステムを構築し，その動きを数値化したハイスループットBST の確立を目指した。ブラインシュリンプはかなり小さいため，一般的な動画撮影用カメラでの撮影は難しい。様々なカメラのデモを試みたところ，ハイスピードカメラが最も良いことがわかった。シュリンプが入ったシャーレの真上にカメラを設置し，コントロール，ポジティブコントロールとしてBST活性を有することが分かっているバングレンを添加し，撮影，トラッキング解析を行った。コントロールとポジティブコントロールで明らかにシュリンプの動きに差が認められ，数値として表すことができた。ただし，シャーレ側面の影にシュリンプが入り込み，解析作業を複雑にすること，シュリンプの餌として加えているクロレラ等がシュリンプと誤認識されることがわかった。迅速な解析作業でなければHTSとして意味をなさないため，細かい微調整が必要となった。餌のタイミング，シャーレの種類，人工海水の容量など様々な検討を行った。その結果，シャーレを高輝度バックライト照明上に置き，真上から撮影することで解決することができた。