アダプタータンパク質とPDZタンパク質の相互作用がもたらすCDC-48の機能制御

点击翻译按钮获取中文摘要

CDC-48は、極めて多岐にわたる機能に関わるAAAシャペロンである。Nドメインアダプター（20数種類）がそれぞれに特異的な基質を認識し、 C末端アダプター（数種類）が基質をどのように処理するかを規定している。しかしながらどのようにしてNドメインアダプターは自身の「特異的基質」を探し出すのかはいまだに明らかではない。線虫NドメインアダプターASPS-1の機能解析を行う過程で、ASPS-1-CDC-48複合体が、寿命や匂い感知機能に関わっていることを見出している。さらにそれぞれの経路において、PDZ結合モチーフタンパク質やPDZドメインタンパク質と相互作用することも発見している。まずCRISPR/Cas9法によりN末にFLAGタグを付加したASPS-1を発現する線虫を構築した。FLAGタグを利用した免疫沈降を行い、共沈物質のマス解析を行なった。DAF-18をはじめとするPDZドメインタンパク質は検出されなかった。逆にHAタグを付加したDAF-18を発現する線虫も構築し、同様に免疫沈降・共沈物質のマス解析を行ったが、ASPS-1やCDC―48は検出されなかった。PDZドメインタンパク質はASPS-1-CDC-48複合体の基質であるので、結合は弱くかつ一過的であると予想されることから、想定されることでもある。ユニークなことに、ASPS-1を免疫沈降した時にCDC-48は確かに検出されたが、CDC-4のさまざまなアダプターのどれもが検出されなかった。UFD-1に関しては、ウエスタンブロッティングによっても確認した。これは、ASPS-1は報告にあるようにCDC-48の解体因子でありデフォルト化に機能している可能性を示唆している。また、ASPS-1を対象とした免疫沈降実験から、翻訳にかかわる因子やリボソーム品質管理に関わる因子がいくつも検出された。