大腸菌染色体分配に関与するDNA結合因子の遺伝生化学的解析

参与大肠杆菌染色体分离的 DNA 结合因子的遗传和生化分析

• 批准号: 06780558
• 负责人: 山中 邦俊
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780558/
• 关键词: 大腸菌; 染色体分配; mukB; 低温ショック蛋白質; cspC; cspE; DNA結合蛋白質; マルチコピーサプレッサー

大腸菌染色体分配に関わる未知の因子を同定することを目的として研究を行ない、mukB106変異を多量コピーで抑制する遺伝子(cspC及びcspE)を単離し以下のことを明らかにした。1.mukB106及びmukB33の変異部位を同定した。mukB106はSer-33がPheに、mukB33ではAsp-1201がAsnに変化していた。cspC及びcspEは、どちらの点突然変異をも抑制することができた。しかしmukB欠損変異を抑制することができなかった。2.アミノ酸配列をもとにホモロジー検索を行った結果、大腸菌には5種のホモログ(CspA、CspB、CspC、CspD及びCspE)が存在することが明らかになった。しかしcspA、cspB及びcspDは多重コピーでもmukB点突然変異を抑制する活性は示さなかった。またcspA及びcspBは低温ショックにより転写誘導されるが、他の3つの遺伝子においては転写誘導は観察されなかった。これらのことは一次構造は似ていても、それぞれの蛋白質は機能的分化をしていることを示唆している。真核生物にもこれらとホモロジーを有する蛋白質が存在することから進化的にも興味のある点である。3.CspC及びCspE蛋白質を精製した。まずそれぞれMalE融合型蛋白質として精製し、その後特異的ペプチダーゼによりMalE部分を切断しゲルろ過により目的の精製蛋白質を得た。これらは共にSDS-PAGE上近接した2本のバンドとして観察される。このことは、これらの蛋白質が何らかの修飾を受けていることを示唆している。現在、精製蛋白質を用いて、DNA結合能及びMukB蛋白質との相互作用を検討している。本年度の研究計画は概ね達成されたと考えている。

Coliform chromosome distribution に masato わ を る の unknown factors with fixed す る こ と を purpose と し て を line な い, mukB106 - different を コ abundant ピ ー で inhibit す る heritage 伝 child (cspC and び cspE) を 単 from below し の こ と を Ming ら か に し た. 1. For mukB106 and びmukB33, the most changed parts を are all determined to be た. mukB106 で Ser-33がPheに, mukB33で た Asp-1201がAsnに variation て て た た. Sudden changes at the cspC and びcspE た and <s:1> ちら <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> points を を suppress する た とがで た た た. <s:1> な <s:1> mukB underloss variation を suppression する とがで とがで な な った った. 2. ア ミ ノ acid with column を も と に ホ モ ロ ジ ー 検 cable line を っ た results, coliform に は five の ホ モ ロ グ (CspA, CspB, CspC, CspD and び CspE) exist が す る こ と が Ming ら か に な っ た. し か し cspA, cspB and び cspD は multiple コ ピ ー で も mukB points - different を suddenly suppress す は る activity in さ な か っ た. ま た cspA and び cspB は cryogenic シ ョ ッ ク に よ り planning write induced さ れ る が, he の 3 つ の posthumous son 伝 に お い て は planning write induced は 観 examine さ れ な か っ た. こ れ ら の こ と は は a structure like て い て も, そ れ ぞ れ の protein は function differentiation を し て い る こ と を in stopping し て い る. Eukaryotes に も こ れ ら と ホ モ ロ ジ ー を have す る protein が exist す る こ と か ら evolutionary に も tumblers の あ る point で あ る. 3.CspC and びCspE proteins を refinement た た. ま ず そ れ ぞ れ MalE type fusion protein と し て refined し, そ の after specific ペ プ チ ダ ー ゼ に よ り MalE part を cut し ゲ ル ろ too に よ り purpose の refined protein を た. <s:1> れら に two copies of <s:1> バ ドと ドと ドと ドと て観 て観 and される are adjacent to にSDS-PAGE. こ の こ と は, こ れ ら の protein が what ら か の modified を by け て い る こ と を in stopping し て い る. Now, the refined protein を interacts を検 with を て, DNA binding energy and びMukB protein と <s:1> to explore <s:1> て る る る. This year, the <s:1> research plan ね is expected to be achieved されたと and えて ね る.

项目成果

Miki T.: "Identification of DNA topoisomerases involved in immediate and transient DNA relazation induced by heat shock in Escherichia coli." Mol.Gen.Genet.244. 451-455 (1994)

Miki T.：“鉴定参与大肠杆菌热休克诱导的立即和短暂 DNA 松弛的 DNA 拓扑异构酶。”

Miki T.: "Lysozyme requires fluctuation of the active site for the manifestation of activity." Protein Engineering. 7. 743-748 (1994)

Miki T.：“溶菌酶需要活性位点的波动才能表现出活性。”

Miki T.: "Formation of a-helix 88-98 is essential in the establishment of higher-order structure from reduced lysozyme." J.Mol.Biol.235. 1312-1317 (1994)

Miki T.：“α-螺旋 88-98 的形成对于还原溶菌酶建立高阶结构至关重要。”

Miki T.: "Temperature shift-up leads to simultaneous and continuous plasmid DNA relaxation and induction of DnaK and GroES proteins in anaerobically growing Escherichia coli cells." FEMS Microbiol.Lett.121. 333-336 (1994)

Miki T.：“在厌氧生长的大肠杆菌细胞中，温度升高会导致同时连续的质粒 DNA 松弛和 DnaK 和 GroES 蛋白的诱导。”

Miki T.: "Loss of flageration in dnaA mutants of Escherichia coli." J.Bacteriol.176. 5544-5546 (1994)

Miki T.：“大肠杆菌 dnaA 突变体失去了标记能力。”