膠芽腫微小環境が形成する治療抵抗性の解明

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申請者らが着目する炎症マーカーLRG1は最も悪性度の高い原発性脳腫瘍である膠芽腫において様々な発現を示した。LRG1発現の高低に関連する遺伝子発現を次世代シークエンス（RNA-seq）で網羅的に解析したところ、LRG1高発現の腫瘍では血管新生、低発現の腫瘍では幹細胞性に関わる遺伝子発現が抽出された。その中で特に発現量の差が大きく、統計学的に有意な遺伝子について、特異抗体を用いた免疫組織化学およびウエスタンブロットで蛋白発現との正の相関を確認した。膠芽腫細胞株の実験ではLRG1を発現抑制（ノックダウン）した細胞でMatrigel浸潤アッセイを行ったところ腫瘍細胞の浸潤亢進が認められ、外因性LRG1投与がこれを抑制することを見出した。一方でWST-1増殖アッセイではLRG1発現抑制は膠芽腫細胞の増殖には影響を及ぼさないことが示された。以上よりLRG1が膠芽腫細胞の浸潤低下に関与しており、先行研究で示したLRG1高発現が予後良好因子であることが支持された。一方で、浸潤に関与する幹細胞性については未評価であるため、今後、幹細胞株を用いた基礎実験を要する。患者由来新鮮手術検体から初代培養を行い、3種類以上の幹細胞株の樹立を行う。これら複数の膠芽腫幹細胞株に対してLRG1ノックダウンを行い幹細胞性の指標であるsphere形成能の上昇、幹細胞マーカーの発現上昇と外因性LRG1投与による効果相殺を確認する予定である。