マラリア原虫メロゾイトの細胞内小器官デンスグラニュールタンパク質の網羅的解析

疟原虫裂殖子细胞内细胞器致密颗粒蛋白的综合分析

• 批准号: 22K07041
• 负责人: 森田 将之
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07041/
• 关键词: マラリア原虫; AGIAタグ; 免疫電子顕微鏡法; デンスグラニュール; メロゾイト; 免疫電子顕微鏡; AirID

マラリア原虫の赤血球侵入型であるメロゾイトは赤血球寄生に特化した細胞内小器官を有する。本研究は、その中でも近年の代表者らの研究によってマラリア原虫の侵入や寄生維持に重要な分子が含まれることが見出されてきたデンスグラニュール (DG) の全貌を明らかにすることを目的としている。代表者の予備研究からDGは、RESAが局在するDG、SUB1が局在するDG、それらのどちらも局在しないDG、の少なくとも3種に免疫電子顕微鏡法 (IEM) によって分類できることが分かっており、それらが独自に機能化して原虫の赤血球寄生を緻密に制御していると考えられる。これまでに既知DGタンパク質には6種、また、代表者が独自に同定したDGタンパク質候補が29種あり、前年度はそれらタンパク質のC末端にAGIAタグを融合させてIEMでタンパク質局在を解析するために研究を遂行した。まずエピソーマル発現によって既知DGタンパク質であるPV1にAGIAタグを融合させてマラリア原虫内で発現させたが、免疫蛍光観察によりエピソーマル発現させたPV1-AGIAがDGに局在する結果を得られなかった。本エピソーマル発現系でタンパク質発現に使われるプロモーターは内在性のものとは異なるため、PV1-AGIAが正常に局在しなくなったと考えた。そこで、シングルクロスオーバーによってマラリア原虫ゲノムDNA中のPV1遺伝子にAGIAタグを組込んだ結果、PV1-AGIAは免疫蛍光法およびIEMでDGに局在する結果を得た。RESAとPV1-AGIAを共染色したIEMの結果、PV1-AGIAはRESAと同じDGに局在することが分かった。本方法によって既知DGタンパク質およびDGタンパク質候補へのAGIAタグ融合を進め、2022年度で計10種のタンパク質へのAGIAタグ融合に成功した。

Youdaoplaceholder0 ラリア protozoan homocytoid red blood cell invasion type であるメロゾ であるメロゾ ト ト する red blood cell parasitism に specialized <s:1> た intracellular small organs を have する. In this study は, そ の で も recent の representatives ら の research に よ っ て マ ラ リ ア parasite の into important parasitic maintain に や が な molecules containing ま れ る こ と が shows さ れ て き た デ ン ス グ ラ ニ ュ ー ル (DG) の whole を Ming ら か に す る こ と を purpose と し て い る. Representatives の reserve study か ら DG は, RESA が bureau in す る DG, SUB1 が bureau in す る DG, そ れ ら の ど ち ら も bureau in し な い DG, less の な く と も three に immune electron 顕 micro mirror method (IEM) に よ っ て classification で き る こ と が points か っ て お り, そ れ ら が に alone function し て protozoon の red blood corpuscle parasitic を dense に suppression し て い る と exam え ら れ る. こ れ ま で に already know DG タ ン パ ク qualitative に は 6, ま た, represent が に alone with し た DG タ ン パ ク qualitative alternate が 29 あ り, former annual は そ れ ら タ ン パ ク qualitative の C terminal に AGIA タ グ を fusion さ せ て IEM で タ ン パ ク quality bureau in analytical す を る た め を に research carries out し た. ま ず エ ピ ソ ー マ ル 発 now に よ っ て already know DG タ ン パ ク qualitative で あ る PV1 に AGIA タ グ を fusion さ せ て マ ラ リ ア parasite within で 発 now さ せ た が, immune 蛍 light 観 examine に よ り エ ピ ソ ー マ ル 発 now さ せ た PV1 - AGIA が DG に bureau in す る results ら を れ な か っ た. This エ ピ ソ ー マ ル 発 now is で タ ン パ ク 発 に now cause the わ れ る プ ロ モ ー タ ー は internality の も の と は different な る た め, PV1 - AGIA が normal に bureau in し な く な っ た と exam え た. そ こ で, シ ン グ ル ク ロ ス オ ー バ ー に よ っ て マ ラ リ ア parasite ゲ ノ ム DNA の PV1 posthumous son 伝 に AGIA タ グ を group 込 ん だ results, the PV1 - AGIA は immune 蛍 method お よ び IEM で DG に bureau in す た を る results. RESA と PV1 - AGIA を were dyed し た IEM の results, the PV1 - AGIA は RESA と with じ DG に bureau in す る こ と が points か っ た. This method に よ っ て already know DG タ ン パ ク qualitative お よ び DG タ ン パ ク qualitative alternate へ の AGIA タ を into め グ fusion, 2022 annual で 10 species の タ ン パ ク qualitative へ の AGIA タ グ fusion に successful し た.

项目成果

マラリア原虫デンスグラニュールタンパク質の網羅的解析

疟原虫致密颗粒蛋白的综合分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Morita M;Kanoi B;Shinzawa N;Kubota R;Takeda H;Sawasaki T;Tsuboi T;Takashima E;森田将之
• 通讯作者: 森田将之

マラリア原虫タンパク質の超微細局在解析のためのAGIAタグシステムの応用

AGIA标签系统在疟原虫蛋白超精细定位分析中的应用

• 发表时间: 2022
• 作者: 森田将之;Kanoi Bernard;新澤直明;窪田理恵;竹田浩之;澤崎達也;坪井敬文;高島英造
• 通讯作者: 高島英造

Ultrastructual localization analysis of Plasmodium falciparum merozoite proteins using AGIA tag-monoclonal antibody system

使用 AGIA 标签-单克隆抗体系统对恶性疟原虫裂殖子蛋白进行超微结构定位分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Morita M;Kanoi B;Shinzawa N;Kubota R;Takeda H;Sawasaki T;Tsuboi T;Takashima E
• 通讯作者: Takashima E

マラリア原虫デンスグラニュールタンパク質の局在解析

疟疾寄生虫致密颗粒蛋白的定位分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 森田 将之;湯口 貴聡;新澤 直明;坪井 敬文;高島 英造
• 通讯作者: 高島 英造

Ultrastructual localization analysis of Plasmodium falciparum proteins using AGIA tag system

使用 AGIA 标签系统对恶性疟原虫蛋白进行超微结构定位分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Morita M;Kanoi B;Shinzawa N;Takeda H;Sawasaki T;Tsuboi T;Takashima E
• 通讯作者: Takashima E