HIV-1粒子形成に至るGag複合体の実体解明

阐明导致 HIV-1 颗粒形成的 Gag 复合物

• 批准号: 22K07102
• 负责人: 駒 貴明
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07102/
• 关键词: Gag; HIV-1; 多量体形成; 集合; 粒子形成; 液-液相分離

HIV-1粒子は集合過程において、骨格を形成するGag前駆体（以後Gag）が細胞膜で多量体を形成することにより起こるが、その初期過程（重要な3つのステップ：Gag二量体化、Gag膜移行、GagとgRNAの結合）は不明な点が多い。本研究課題ではGag集合過程で認められる複合体の実態を明らかにするために、まずそれぞれ初期過程で重要な上述3つのステップが阻害される変異体（Gag二量体化不全WMAA変異体、Gagミリストイル化不全G2A変異体、gRNA結合不全NC変異体）を構築し、Gag複合体について解析を行なった。WMAAを用いたMembrane flotation assayの結果、Gagの二量体化が阻害されると膜へ行く効率が半減した。またG2A変異体を用いたCloss-link assayの結果、二量体以上の多量体形成が阻害されていた。すなわち、まず細胞質内でGag二量体化の大部分が起こり、次に膜移行・膜結合すると考えられた。WMAA変異体やG2A変異体のGagもgRNAと結合することが知られているため、gRNAは決まった時点ではなく、出芽までの過程でGagに結合すると考えられた。そこで次にNC変異体について同様の解析を実施した結果、gRNAとの結合の有無は膜移行に関与しないこと、またCloss-link assayで確認できる6量体形成までは進んでいることが明らかになった。次にNC変異体のVelocity sedimentation assayを実施した結果、10Sや80S複合体は観察されたが、500S/750S複合体の割合が顕著に低下していることが明らかとなり、gRNAとの結合は高次でのGag多量体形成に重要であることが示唆された。これまでの報告と合わせると、10S複合体、80S複合体はGagの2量体化、膜移行、gRNAとの結合に関与ないことが明らかとなった。

HIV - 1 particle は collection process に お い て, bone を formation す る Gag 駆 body (Gag) later before が で cell membrane formed quantity body を す る こ と に よ り up こ る が, そ の early process (important な 3 つ の ス テ ッ プ : body of Gag 2, Gag membrane migration, Gag と gRNA の) は が い more unknown な point. This research topic で は Gag で collection process to recognize め ら れ る complex の state be を Ming ら か に す る た め に, ま ず そ れ ぞ れ preliminary process で important な these 3 つ の ス テ ッ プ が resistance against さ れ る - variants (Gag 2 quantity body is not complete WMAA - variants, Gag ミ リ ス ト イ ル not perfect G2A - variants, incomplete gRNA combined with NC - variants) Youdaoplaceholder0 construct the に, Gag complex に て て analysis を line なった. WMAA を with い た be flotation assay, Gag の quantity body の result が resistance against さ れ る と Membrane へ line く sharper rate が half し た. ま た G2A - variant を with い た Closs cc-link assay の results, two more than above quantity body の quantity body form が resistance against さ れ て い た. In the cytoplasm of すなわち and まず, the でGag dimer is mostly が. The すると and subに membranes are translocated. Membrane binding すると is found in えられた. WMAA variations with や G2A - variant の Gag も gRNA と combining す る こ と が know ら れ て い る た め, gRNA は definitely ま っ た point で は な く, budding ま で の process で Gag に combining す る と exam え ら れ た. そ こ に NC で time - variant に つ い て with others in analytical を の be applied し た results, gRNA と の combining の presence of transitional は membrane に masato and し な い こ と, ま た Closs cc-link assay で confirm で き form ま る 6 quantity body で は into ん で い る こ と が Ming ら か に な っ た. The subに NC variant <s:1> Velocity sedimentation Assay を be applied し た results, 10 s や 80 s complex は 観 examine さ れ た が, 500 s / 750 s complex の cut が 顕 with low に し て い る こ と が Ming ら か と な り, gRNA と の combining は higher で の Gag quantity body to form more important で に あ る こ と が in stopping さ れ た. こ れ ま で の report と close わ せ る と, 10 s complex, 80 s complex は Gag の body of 2, membrane migration, gRNA と の combining に masato and な い こ と が Ming ら か と な っ た.