自然免疫型T細胞分化を担う核内リン酸化酵素の基質同定と転写プログラム誘導機構

鉴定负责先天免疫 T 细胞分化和转录程序诱导机制的核激酶底物

• 批准号: 22K07117
• 负责人: 石川 絵里
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07117/
• 关键词: 自然免疫型T細胞分化; 転写プログラム; セリンスレオニンキナーゼ; 自然免疫型T細胞

自然免疫型T細胞に属するインバリアントナチュラルキラーT (iNKT) 細胞や粘膜関連インバリアントT (MAIT) 細胞の胸腺での分化機構は、従来のT細胞に比べ未だ不明な点が多い。また、自然免疫T細胞の分化には転写因子PLZFが必須であるが、T細胞受容体からPLZF発現に至る分子機構の詳細は明らかになっていない。これまでの研究で、プロテインキナーゼD (PKD)のCD4-Cre TgによるT細胞特異的欠損マウスにおいて、従来のT細胞は正常であるものの、自然免疫T細胞のみが消失することを見出した。この消失はPLZF Tgの導入により回復し、PKDがPLZFの発現誘導に寄与することが示唆された。本研究では、自然免疫T細胞のみが特異的に消失するユニークなPKD欠損マウスを用い、PKDの基質分子を同定し、リン酸化の意義を明らかにすることで、自然免疫T細胞分化に至る転写プログラムの誘導機構を明らかにすることを目的としている。これまでの研究によりiNKT細胞においてPKDは、TCR刺激により活性化することを見出している。また、iNKT細胞におけるPKD基質として転写因子を同定済みであることから、当該転写因子がiNKT細胞で特異的に制御する可能性のある遺伝子をクロマチン免疫沈降ChIP-seqにより解析した。その結果、当該転写因子のPLZF遺伝子上流への結合が認められたため、ChIP-qPCRおよびルシフェラーゼアッセイを行い、PLZFの転写制御に寄与するか否か検討を行った。さらに、PKDによるリン酸化が基質分子にどのような機能変化をもたらすかを調べるため、TurboID融合基質コンストラクトをiNKT細胞株に導入し、BioID (近位依存性ビオチン化) 法を用いて、リン酸化により制御される相互作用分子の同定を試みた。

The natural immune T cells belong to the differentiation mechanism of thymic T (iNKT) cells, mucosa-associated T (MAIT) cells, and more T cells come from unknown sites than from unknown sites. The differentiation of natural immune T cells requires the expression of PLZF, the expression of PLZF in T cell receptors and the detailed expression of molecular mechanisms. These studies have revealed that CD4-Cre Tg of PKD is associated with T cell-specific deficits, and that T cells are normal, and that natural immune T cells disappear. The disappearance of PLZF Tg induced by the recovery, PKD PLZF induced by the emergence of the response The purpose of this study is to use PKD depletion markers to specifically eliminate the core of natural immune T cells, to identify the matrix molecules of PKD, and to clarify the significance of phosphorylation. The purpose of this study is to clarify the induction mechanism of the programming platform for natural immune T cell differentiation. These studies have shown that PKD and TCR stimulation in iNKT cells are activated. Moreover, the PKD matrix and the transcription factor in iNKT cells are equally determined. The possibility that this transcription factor is specifically controlled by iNKT cells and the genetic factors are analyzed by means of Keraton immune sedimentation ChIP-seq. As a result, when the PLZF gene of the writing factor is combined with the flow, the ChIP-qPCR and the PLZF gene are used, and the PLZF gene control is used. In addition, pKD and pKD were used to modulate the functional transformation of matrix molecules. TurboID fusion matrix molecules were introduced into iNKT cell lines. BioID (proximity-dependent pKD) was used to identify interacting molecules.