プロテオーム熱安定性評価法（TPP）によるがん細胞の酸化ストレス耐性機構の解明

利用蛋白质组热稳定性评价（TPP）阐明癌细胞的氧化应激抵抗机制

• 批准号: 22K07144
• 负责人: 小林 大樹
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Niigata University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07144/
• 关键词: 酸化ストレス; Thermal proteome profile; がん細胞; がん; 活性酸素種; 構造・機能プロテオミクス; タンパク質熱安定性

がんは微小環境で過剰に産生した活性酸素種 （ROS）にさらされながらも、さまざまな戦略によって酸化ストレス耐性を獲得し、更なる悪性化へと進んでいく。この過程においてROSにより酸化修飾を受けた様々なタンパク質が機能を変化させ、その結果がん特有の酸化ストレス耐性機構が生み出されると考えられているが、その詳細なメカニズムは不明な点が多く存在する。そこでタンパク質の構造や存在状態を包括的に計測するための技術を用いて、ROSによって修飾されたタンパク質の存在状態を指標にがん細胞の酸化ストレス応答を解析するため、申請者らの研究室が所有する各種がん細胞の中からに酸化ストレス応答性を評価した。特にROSとその悪性度が密接に関与している前立腺がんの細胞株における内在性ROSレベルとプロテオーム発現状態をした結果、ROSレベルが高いDU145細胞株において、カタラーゼなどROSを除去する酵素群の発現が低下し、一方でチオール基を還元状態にするチオレドキシンシステムを構成する分子群の発現が亢進しており、タンパク質チオール基のレドックス恒常性の維持に寄与していることが示唆された。また、タンパク質存在状態を解析するためのThermal proteome profiling(TPP)法を実施するために、Peroxiredoxin-1抗体を用いたThermal Shift assayにより予備検討を行った。その結果、Peroxiredoxin-1の熱安定性が亢進する過酸化水素の処理条件を確立した。

The active acid species produced by the micro-environment (ROS) ROS The resistance to acidification is obtained, and the resistance to acidification is improved.この process においてROS によりAcidification modification をReceived けた様々なタンパク Quality が Function を Changing させ, その result がん Unique acid Chemical resistance mechanism が生み出されると考えられているが, そのDetails なメカニズムはUnknown な点が多くexistent する.そこでタンパク性のexistent stateをincludes にmeasurementするためのtechnical useいて, ROSによってmodified されたタンパクquality のexistent stateを indicatorにがん Cell Acidification ストレス応 Answer を Analysis するため、Applicant らの LaboratoryがAll する Various がん cells の中からにAcidified ストレス応Answer properties を価した. The characteristics of special ROS are closely related to the prostatic gland cell line and the intrinsic ROS of the prostate.ーム発existing status をした results, ROSレベルが高いDU145 cell line において, カタラーゼなどROSをremovalすThe enzyme group is low and the enzyme group is in its original state, and the enzyme group is in its original state.発appears to be hyperactive and しており, and タンパク性チオール记のレドックスconstant のmaintenance and していることがshows 唆された. Thermal proteome profiling (TPP) method, Peroxiredoxin-1 antibody application, Thermal Shift The assay is ready. As a result, the thermal stability of Peroxiredoxin-1 was improved, and the treatment conditions of superacidified hydrogen were established.