転移性乳癌で生じる多様な変異体タンパク質の機能異常性の網羅的解析と病的意義の解明

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本研究は、転移性乳がんで生じる多様な変異体タンパク質の機能異常性を網羅的に解析するための実験系を構築し、その病的意義を明らかにすることを目的とする。はじめに、転移性乳がんで特異的に認められる遺伝子変異を抽出し、機能解析の対象とする候補を選定することを試みた。乳がんゲノム解析の各種文献やTCGA、COSMIC等の公共データベースから遺伝子変異に関するデータ（遺伝子上のアミノ酸部位、塩基置換の種類、アリル頻度等）を抽出し、原発乳がんと転移性乳がんでの頻度を網羅的に解析し、転移性乳がんで有意に頻度が上昇する変異群を同定した。さらに文献的な考察も加え、機能解析の対象とする変異候補を絞り込んだ。つぎに、変異体たんぱく質の機能異常性を網羅的に解析するためのシステム構築を試みた。本研究ではシングルセル解析とバーコード技術を組み合わせて、変異体の機能的解析を実施する計画である。そのため、ベクターの種類を特定できるバーコードをscRNA-seq解析やscATAC-seq解析で検出できるようなレンチウイルスベクターのシステムの構築を試みている。そのために必要なコンストラクトを作成し、各種実験条件の検討を行っている。さらに変異体の機能解析を実施する上で、どの細胞を用いて解析するかの選定が重要となる。そのため、いくつかの遺伝子のレポーターベクターを作成し、複数の乳がん細胞株においてレポーター活性を測定しデータベース化している。それにRNA-seqデータやATAC-seqデータのプロファイルを加味して、変異体の機能解析を実施するための最適な細胞株の選定を試みている。