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スキルス胃癌の浸潤や腹膜播種に寄与するチロシンリン酸化蛋白質の解明

阐明有助于硬质胃癌侵袭和腹膜播散的酪氨酸磷酸化蛋白

基本信息

批准号：
22K07176
负责人：
白木原琢哉
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

スキルス胃がん細胞株から以前に同定したおよそ250種類のリン酸化タンパク質のリストをもとに、研究計画ではCRISPR-Cas9によるノックアウトスクリーニングを計画している。本年度は、CRISPR-Cas9ノックアウトライブラリの実験系立ち上げと並行して、リン酸化タンパク質リストのうち注目因子の機能解析を行った。LSR(lipolysis-stimulated lipoprotein receptor)はFGFR2シグナルの亢進したスキルス胃がんにおいて強くリン酸化修飾を受けることを見出している。この受容体はコレステロールの輸送体である VLDLを細胞内へ取り込むことから、VLDLを培養液中に添加したところ、濃度依存的にFGFR2型スキルス胃癌の増殖を促進することが明らかとなった。さらに、FGFRのキナーゼ阻害剤を加えたところ、VLDLによる細胞増殖が抑制された。そこで、まずFGFR2によるLSRリン酸化部位を特定することを目指した。LSRにはリン酸化標的として報告されているチロシン残基が16ヶ所存在し、そのうちチロシンキナーゼの標的となりやすい10ヶ所についてフェニルアラニンへの点変異を導入した。いくつかの変異ではリン酸化の程度は野生型と比較して弱くなるものの完全には消失しないことから、LSRは複数箇所がリン酸化標的となることが示唆された。

スキルス Gastric cell strain からformer に同定したおよそ250 species のリン acidified タンパクquality のリストをもとに、Research project CRISPR-Cas9 project project. This year, the CRISPR-Cas9 technology has been establishedとparallel して, リン acidified タンパクquality リストのうちattention factor のfunctional analysis を行った. LSR (lipolysis-stimulated lipoprotein Receptor) FGFR2 has a strong acidification and modification of the acidification of the stomach.このReceiver はコレステロールのTransporter であるVLDL can be taken out of cells and added to the culture medium. Concentration-dependent growth and development of FGFR2-type gastric cancer is promoted.さらに, FGFR のキナーゼInhibition 扤をAdd えたところ, VLDL による Cell Proliferation がInhibition された.そこで, まずFGFR2 によるLSR リン acidification site をspecific することを Eye refers to した. The acidification target of LSR acidification is reported to be the existence of 16 residues of されているチロシン residue, and the そのうちチロThe standard となりやすい10いについてフェニルアラニンへのPoint変differentを Importした.いくつかの変different ではリンacidification degree は wild type と comparison して weak くなるもののcomplete にはしないことから, LSR はplural 箇sho がリンacidification target となることがshows instigation された.