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難治がんに有望ながん免疫effector T細胞特性の基盤的解明と細胞治療開発

从根本上阐明癌症免疫效应 T 细胞的特性，有望用于治疗顽固性癌症和细胞疗法的开发

基本信息

批准号：
22K07251
负责人：
西田純幸
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07251/
关键词：
WT1 CTL high-avidity TCR がん免疫療法細胞傷害性T細胞膵臓がんがんワクチン

项目摘要

進行膵臓癌患者を対象に実施したゲムシタビン（GEM）併用WT1ペプチドワクチン療法の臨床試験で採取した血液臨床検体の末梢血単核細胞（PBMCs）から、high-avidity T細胞受容体（TCR）を単離することを目的として実験を遂行した。最初に、HLA-A*02:01陽性進行膵癌患者17例（治療別－GEM + WT1ワクチン：8例／GEM単独：9例）のPBMCsから HLA-A*02:01拘束性WT1ペプチド WT1-126ペプチド（WT1-126）に特異的なTCRを有する細胞傷害性T細胞（CTL）を単離した。low-avidity TCRを持つ細胞を増殖させないために、PBMCsを低濃度（10 ng/μL)のWT1-126で刺激しながら1週間培養しCTLを増幅してWT1-126 tetramer陽性細胞(WT1-126-CTLs)をsingle cell sortingした。結果、全体として46個のWT1-126-CTLsクローンの増殖を認めた。WT1ペプチドワクチンを受けた患者由来のPBMCs(8例中7例で誘導可能だった)から主としてこれらのWT1-126-CTLsを得た。次に、樹立したWT1-126-CTLs の46クローンそれぞれの機能評価を目的にWT1-126ペプチド反応性をサイトカイン（IFN-gamma）産生能で評価した。高濃度WT1-126（1000 ng/μL）刺激では全クローンでIFN-gamma産生を認めたが、その中に低濃度WT1-126（10 ng/μL）刺激下においても高いサイトカイン産生能を発揮する5クローンを同定した。更にこれら5クローンのTCRα鎖およびβ鎖のCDR3配列を解析したところ、2クローンは同じCDR3を有しており、同一クローンであることが分かった。現在は得られた4クローン由来TCRを2D3細胞（TCRシグナルの活性化を、GFP発現を指標として評価できるNFAT-GFPレポーター細胞）に導入し、導入TCRの細胞表面発現ならびに、WT1ペプチド濃度依存的GFP発現を評価している。今後、TCRをヒトT細胞に発現させ、細胞傷害活性およびサイトカイン産生能などを評価することで、臨床に使用できるようなWT1特異的TCRであることを示す。

The aim of this study was to conduct clinical trials of peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) and high-avidity T cell receptors (TCRs) in patients with cancer and to use WT1 to treat them. Initially, 17 patients with HLA-A*02:01-positive progressive cancer (treatment-by-GEM + WT1:8/GEM alone: 9) had PBMCs with specific TCR and cytotoxic T cells (CTLs) isolated from HLA-A*02:01-binding WT1 - 126. WT1 - 126 cells were stimulated by PBMCs at low concentrations (10 ng/μL), and CTL activity increased during 1 week of culture. Results: All 46 WT1-126-CTLs were identified. WT1 -126-CTLs were obtained from PBMCs derived from patients who were not affected by WT1 drugs (7 of 8 cases were possibly induced). Next, WT1 - 126-CTLs 46 ° C and 46 ° C (IFN-gamma) generation capability evaluation IFN-gamma production was observed at high concentrations of WT1-126 (1000 ng/μL) and at medium and low concentrations of WT1-126 (10 ng/μL). In addition, the CDR3 of the TCRα lock and β lock of the TCR 5 lock are analyzed and the CDR3 of the TCR α lock and β lock are analyzed. Now we have obtained the following results: 1. TCR gene was introduced into 2D3 cells (TCR gene activation, GFP expression index and evaluation of NFAT-GFP gene expression), 2. TCR gene expression on the cell surface was evaluated, and 2. TCR gene expression concentration-dependent GFP expression was evaluated. In the future, TCR gene expression, cell injury activity and TCR gene production ability will be evaluated and used clinically.