難治がんに有望ながん免疫effector T細胞特性の基盤的解明と細胞治療開発

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進行膵臓癌患者を対象に実施したゲムシタビン（GEM）併用WT1ペプチドワクチン療法の臨床試験で採取した血液臨床検体の末梢血単核細胞（PBMCs）から、high-avidity T細胞受容体（TCR）を単離することを目的として実験を遂行した。最初に、HLA-A*02:01陽性進行膵癌患者17例（治療別－GEM + WT1ワクチン：8例／GEM単独：9例）のPBMCsから HLA-A*02:01拘束性WT1ペプチド WT1-126ペプチド（WT1-126）に特異的なTCRを有する細胞傷害性T細胞（CTL）を単離した。low-avidity TCRを持つ細胞を増殖させないために、PBMCsを低濃度（10 ng/μL)のWT1-126で刺激しながら1週間培養しCTLを増幅してWT1-126 tetramer陽性細胞(WT1-126-CTLs)をsingle cell sortingした。結果、全体として46個のWT1-126-CTLsクローンの増殖を認めた。WT1ペプチドワクチンを受けた患者由来のPBMCs(8例中7例で誘導可能だった)から主としてこれらのWT1-126-CTLsを得た。次に、樹立したWT1-126-CTLs の46クローンそれぞれの機能評価を目的にWT1-126ペプチド反応性をサイトカイン（IFN-gamma）産生能で評価した。高濃度WT1-126（1000 ng/μL）刺激では全クローンでIFN-gamma産生を認めたが、その中に低濃度WT1-126（10 ng/μL）刺激下においても高いサイトカイン産生能を発揮する5クローンを同定した。更にこれら5クローンのTCRα鎖およびβ鎖のCDR3配列を解析したところ、2クローンは同じCDR3を有しており、同一クローンであることが分かった。現在は得られた4クローン由来TCRを2D3細胞（TCRシグナルの活性化を、GFP発現を指標として評価できるNFAT-GFPレポーター細胞）に導入し、導入TCRの細胞表面発現ならびに、WT1ペプチド濃度依存的GFP発現を評価している。今後、TCRをヒトT細胞に発現させ、細胞傷害活性およびサイトカイン産生能などを評価することで、臨床に使用できるようなWT1特異的TCRであることを示す。