权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

悪性グリオーマの遺伝子細胞治療に向けたヒト歯髄幹細胞の加工と製剤化

用于恶性胶质瘤基因细胞治疗的人牙髓干细胞的加工和配制

基本信息

批准号：
22K07289
负责人：
池野正史
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Aichi Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究の悪性グリオーマに対する自殺遺伝子療法とは、ヒト間葉系幹細胞を利用して自殺遺伝子HSVtkを腫瘍組織へデリバリーする方法であり、これまでにヒト間葉系幹細胞をベースとしたHSVtk保有細胞を株化する基本技術は確立した。本研究ではHSVtk保有細胞の製剤化に向けて歯髄幹細胞に特化し、HSVtk保有細胞株群から抗腫瘍効果の有効性、長期培養に伴う品質安定性などを評価対象として高機能な細胞株を選別することを目的とする。ウイルスによる遺伝子導入とは異なり、株化に伴い培養期間が長期化するため、腫瘍組織への集積機能を維持するためにはTERT遺伝子による寿命延長は不可欠である。2022年度は、選別対象となるHSVtk保有する細胞群の作製準備段階として、歯髄幹細胞を用いて一連の作製過程を検証するとともに、歯髄幹細胞のTERT遺伝子による寿命延長効果を評価した。その結果、線維芽細胞や臍帯由来幹細胞と比較すると、歯髄幹細胞の寿命延長効果は低く、株化後数継代で増殖速度が遅くなり、細胞形態の変化が生じた。そこで、複数由来の歯髄幹細胞の検討、培養時の脱アセチル化酵素の阻害剤SAHAによる処理、および株化過程の期間短縮の検討をおこなったが、寿命延長効果の向上には至っていない。一方で、細胞種によりTERT遺伝子の効果が異なる原因を見つけるために、TERT導入の前後における遺伝子変動をRNAseqにより解析した。

This study established the basic techniques for the isolation of HSVtk cells from tumor tissue using HSVtk cells. The purpose of this study is to evaluate the viability of HSVtk-containing cell lines, the quality stability of HSVtk-containing cell lines, and the selection of high-functioning cell lines. It is necessary to extend the life span of the gene by introducing the gene into the cell and maintaining the accumulation function of the tumor tissue during the culture period. In 2022, the evaluation of the effect of life extension of HSVtk cell population on the production preparation stage and the continuous production process of HSVtk cell population was carried out. As a result, compared with linear germ cells and umbilicus-derived stem cells, the life-prolonging effect of dental stem cells is low, the proliferation rate is very high several generations after differentiation, and the cell morphology changes greatly. In this paper, we discuss the origin of multiple dental stem cells, the treatment of SAHA, the treatment of time shortening in the process of differentiation, and the upward movement of life extension effect. The reasons for the differences in the results of TERT gene expression in one cell species and TERT gene expression before and after introduction are analyzed.