悪性グリオーマの遺伝子細胞治療に向けたヒト歯髄幹細胞の加工と製剤化

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本研究の悪性グリオーマに対する自殺遺伝子療法とは、ヒト間葉系幹細胞を利用して自殺遺伝子HSVtkを腫瘍組織へデリバリーする方法であり、これまでにヒト間葉系幹細胞をベースとしたHSVtk保有細胞を株化する基本技術は確立した。本研究ではHSVtk保有細胞の製剤化に向けて歯髄幹細胞に特化し、HSVtk保有細胞株群から抗腫瘍効果の有効性、長期培養に伴う品質安定性などを評価対象として高機能な細胞株を選別することを目的とする。ウイルスによる遺伝子導入とは異なり、株化に伴い培養期間が長期化するため、腫瘍組織への集積機能を維持するためにはTERT遺伝子による寿命延長は不可欠である。2022年度は、選別対象となるHSVtk保有する細胞群の作製準備段階として、歯髄幹細胞を用いて一連の作製過程を検証するとともに、歯髄幹細胞のTERT遺伝子による寿命延長効果を評価した。その結果、線維芽細胞や臍帯由来幹細胞と比較すると、歯髄幹細胞の寿命延長効果は低く、株化後数継代で増殖速度が遅くなり、細胞形態の変化が生じた。そこで、複数由来の歯髄幹細胞の検討、培養時の脱アセチル化酵素の阻害剤SAHAによる処理、および株化過程の期間短縮の検討をおこなったが、寿命延長効果の向上には至っていない。一方で、細胞種によりTERT遺伝子の効果が異なる原因を見つけるために、TERT導入の前後における遺伝子変動をRNAseqにより解析した。