染色体ベクターによるゲノム解析法の確立

利用染色体载体建立基因组分析方法

• 批准号: 22510218
• 负责人: 池野 正史
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2010
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2010-04-01 至 2013-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22510218/
• 关键词: ヒト人工染色体; HAC; HLA-G; クロマチン; 遺伝子発現制御; プロモーター; ゲノム; 組換え; ヒト人工染色体ベクター

本研究の目的は、1コピーで安定に維持されるHACベクターを利用して、ゲノム配列機能を検定する方法の開発と確立である。今年度はヒト主要組織適合抗原遺伝子クラスターの一つであるHLA-G遺伝子上流域に見いだされた、発現抑制に関与する候補配列の機能検証を行った。1、HLA-Gの最小プロモーターおよびCMVプロモーターとEGFP遺伝子からなる発現カセットに、遺伝子抑制の候補配列を連結した検証用コンストラクトを作製した後に、HACベクターを保有するヒトHT1080細胞に導入し、HACベクターに1分子の検証用コンストラクトを搭載した細胞株を10株作製した。2、各細胞株のEGFP蛍光観察とRT-PCRによる発現解析より、検証配列にはHLA-G遺伝子プロモーターに対する発現抑制効果があり、加えてCMVプロモーターに対する抑制効果があることを実証した。本配列による遺伝子抑制は、特定プロモーターに対する効果ではなく、一般的効果であることが推測された。3、発現抑制効果の一般性を検証するためにマウス細胞を用いて検討し、HT1080細胞と同様な発現抑制効果を確認した。4、発現抑制に関与する配列は、トランスポゾンであるLINE1の一部に対応した。遺伝子発現の抑制機能に関して、一般的なLINE1配列と検証配列とを比較検討した。その結果、HLA-Gの上流に見いだされた特定のLINE配列が発現抑制効果を有することがわかった。5、抑制効果の機構を明らかにするために、特定LINE配列のDNA2次構造に注目して検討を進めた。

は の purpose, this study 1 コ ピ ー で settle に maintain さ れ る d ベ ク タ ー を using し て, ゲ ノ ム match column function を 検 set す る method の open 発 と establish で あ る. The main organizing group is suitable for our は ヒ ト antigen heritage 伝 son ク ラ ス タ ー の a つ で あ る HLA - G heritage in watershed に 伝 see い だ さ れ た, 発 now suppression に masato and す る alternate with column の line card function 検 を っ た. Minimum 1, HLA - G の プ ロ モ ー タ ー お よ び CMV プ ロ モ ー タ ー と EGFP heritage 伝 son か ら な る 発 now カ セ ッ ト に, heritage 伝 inhibit の alternate with sequence を link し た 検 card コ ン ス ト ラ ク ト を cropping し た に, d) after ベ ク タ ー を retain す る ヒ ト HT1080 cells に import し, d ベ ク タ ー に の 1 molecule Youdaoplaceholder0 was prepared by loading を10 <s:1> た cell lines with コ ストラ ストラ トを トを トを. 2, each cell lines の EGFP 蛍 light 観 examine と rt-pcr に よ る 発 now parse よ り, 検 certificate with column に は traces of HLA - G 伝 son プ ロ モ ー タ ー に す seaborne る 発 now inhibit unseen fruit が あ り, え て CMV プ ロ モ ー タ ー に す seaborne る inhibition of unseen fruit が あ る こ と を card be し た. This match column に よ る heritage 伝 inhibit は, specific プ ロ モ ー タ ー に す seaborne る unseen fruit で は な く, general services fruit で あ る こ と が speculation さ れ た. 3, 発 inhibit sharper now fruit の general を 検 card す る た め に マ ウ ス cells を using い て beg し 検, と HT1080 cells with others な 発 inhibition of unseen fruit を now confirm し た. 4. The occurrence of the inhibition of に is related to する in conjunction with する, トラ スポゾ スポゾ である であるLINE1 <s:1> one に against 応 た た. The <s:1> inhibitory function of 伝 offspring is に related to て, and the general なLINE1 configuration と検 evidence configuration とを is more 検 and た. The そ そ results showed that in the upper flow of HLA-G, に was found to have an inhibitory effect on the が だされた だされた specific <s:1> LINE combination が. Youdaoplaceholder4 there were する する とがわ が った った った. 5. Inhibitory effect <s:1> mechanism を ら にするために にするために specific LINE configuration <s:1> DNA secondary structure に pay attention to <s:1> て検 discuss を enter めた.

项目成果

Construction and Use of a Bottom-Up HAC Vector for Transgene Expression

• DOI: 10.1007/978-1-61779-099-7_7
• 发表时间: 2011-01-01
• 期刊: MAMMALIAN CHROMOSOME ENGINEERING: METHODS AND PROTOCOLS
• 作者: Ikeno, Masashi;Suzuki, Nobutaka
• 通讯作者: Suzuki, Nobutaka

LINE family members are potential negative regulators of gene expression

LINE 家族成员是基因表达的潜在负调节因子

• 发表时间: 2011
• 作者: 平野満(責任編集);幸田正孝;共編;平野満;平野満;平野満(シンポジウムの司会兼務);平野満(監修)・練馬区立石神井ふるさと文化館(編);Masashi Ikeno;池野正史
• 通讯作者: 池野正史

染色体ベクターによる遺伝子発現の制御領域の解析

使用染色体载体分析基因表达调控区

• 发表时间: 2010
• 作者: 平野満(責任編集);幸田正孝;共編;平野満;平野満;平野満(シンポジウムの司会兼務);平野満(監修)・練馬区立石神井ふるさと文化館(編);Masashi Ikeno;池野正史;池野正史
• 通讯作者: 池野正史