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乳癌原発巣におけるESR1遺伝子変異の高感度検出

高灵敏检测原发性乳腺癌肿瘤中ESR1基因突变

基本信息

批准号：
22K07301
负责人：
橋本陽子
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07301/
关键词：
ESR1 mutation primary breast cancer 乳癌 ESR1 変異解析再発リスク

项目摘要

乳癌原発巣でのESR1変異を高感度に検出する変異解析手法の確立を進めている。具体的には、変異を有する遺伝子のみを選択的に増幅させるPCR clampingを応用し、ESR1 wild-type DNAをclampする人工核酸（LNA oligo）を設計し、変異の濃縮効果や解析結果への影響を確認している。変異検出のターゲットは、ESR1変異の上位2変異であるY537S (1610A>C)およびD538G(1613A>G)とし、そのそれぞれの変異部位に対して独自のLNA-oligoを設計した。設計したLNA-oligoでのclamp効果を検証した結果、約6,000万コピーもの大量のwild-type DNAをクランプできることが実証された。また、wild-typeとmutant-typeを混ぜてPCRを行い、wild-typeを完全にブロックし、混在する変異オリゴには影響を与えないPCR条件を検討した。このLNA oligoを用いてESR1変異検出の感度検定を行い、0.003%程度の微小変異まで検出できることを確認した。さらに、原発巣に含まれる微小変異をより高確率に捉えるために、DNAではなくmRNA(cDNA)を解析対象とすることとした。予備実験として、乳癌細胞株10種にてDNAとmRNAのESR1発現割合を比較し、ER陽性細胞株ではmRNAの方が約3.42倍(1.02-8.92)発現が多い事も実証された。今後は、pilot studyとして、実際のサンプルでmRNA(cDNA)を用いて解析を行ったのち、対象症例での変異解析を行う予定としている。

The primary ESR1 of breast cancer was highly sensitive, and the analytical technique was confirmed to be in progress. For a specific device, you can use the selected PCR clamping filter, ESR1 wild-type DNA clamp filter artificial Nucleic Acid (LNA oligo) device, and analyze the results. The results show that you can confirm the error. In this case, you need to know that the location of the device, which is located in the upper 2 position of the ESR1 machine, is used in the design of the LNA-oligo device on its own. It is necessary to design and analyze the results of LNA-oligo and clamp results, which is about 60 million per cent. There are a large number of wild-type DNA health problems. Mix the PCR line with the wild-type mutant-type, mix the PCR condition with the PCR condition, and mix it with each other. The "LNA oligo" uses the "ESR1" to determine the line, and 0.003% to the degree of "tiny" to "confirm". The original one contains the following information: high accuracy, high accuracy, When 10 kinds of DNA cell lines and breast cancer cell lines were divided into two groups, the cut-off ratio was 3.42 times (1.02-8.92), and that of ER cell lines was 3.42 (1.02-8.92). The multiple events were detected. In the future, pilot study analysis, international information analysis and mRNA (cDNA) will be used to analyze the symptoms, symptoms and symptoms.