細胞骨格動態制御によるALS病態改善の試み

尝试通过控制细胞骨架动力学来改善 ALS 病理学

• 批准号: 22K07539
• 负责人: 清水 幹人
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07539/
• 关键词: RGMa; ALS; 細胞骨格; 筋萎縮性側索硬化症(ALS); 異常蛋白凝集; 反発性軸索ガイダンス因子(RGMa)

2022年度はRepulsive guidance molecule A(RGMa)抗体を投与したALSモデルマウスにおける、細胞骨格動態の検証を行った。ファロイジンとDNaseⅠによる免疫染色によりアクチン重合の程度の可視化を行ったところ、ALSモデルマウスにおいてアクチンの脱重合が誘導され、RGMa抗体投与によりそれが改善することが示された。またwestern boltをおこなうことで、RGMaシグナルの活性化の程度を定量化した。RGMaは細胞膜上のNeogeninと結合することで、Rhoを中心としたsmall GTPaseの経路を活性化することが知られている。今回、その下流であるSMADやProfilin、Cofilinの活性化を確認した所、ALSモデルマウスにおいてアクチン重合を阻害するCofilinが活性化しており、RGMa抗体投与によりそれが改善することが確認された。一方でもともと予想されていた、ALSモデルマウスにおけるtubulinの脱重合に関しては、CRMP2などの上流のシグナルをwestern blotで定量化したが、メカニズムを推定できるような明瞭な結果を得ることができなかった。またすでに2023年度に予定していた神経細胞のcell lineやラットの神経細胞primary cellを用いて、in vitroにおける、RGMaと細胞骨格動態の実験系を確立しつつある。目下、RGMaの刺激が入りやすい細胞腫のスクリーニングを行っており、SHSYやNeuro2Aといった神経細胞のcell lineを使用し、RGMaで刺激を行い下流のシグナルを検討しているが、通常の条件では十分な刺激が入らないことが確認された。現在ラット神経細胞のprimary cellの樹立を行い、検討中である。

In 2022, the <s:1> Repulsive guidance molecule A(RGMa) antibody を was administered in conjunction with the <s:1> たALSモデ ウスにおける ウスにおける ウスにおける ウスにおける ウスにおける ウスにおける and the dynamic <s:1> 検 of the cell grid った for を administration った. フ ァ ロ イ ジ ン と DNase Ⅰ に よ る immune dyeing に よ り ア ク チ ン coincidence degree の の visual line を っ た と こ ろ, ALS モ デ ル マ ウ ス に お い て ア ク チ ン の overlap が off induced さ れ, RGMa antibody cast with に よ り そ れ が improve す る こ と が shown さ れ た. Youdaoplaceholder0 western boltをお なう なう とで とで, を quantification of the <s:1> activation <e:1> degree of RGMaシグナ を <s:1> た た. RGMa は membrane の Neogenin と combining す る こ と で, Rho を center と し た small GTPase の 経 road を activeness す る こ と が know ら れ て い る. Today, back そ の obscene で あ る SMAD や Profilin, Cofilin の activeness を confirm し た, ALS モ デ ル マ ウ ス に お い て ア ク チ ン overlap を resistance against す る Cofilin が activeness し て お り, cast and に RGMa antibody よ り そ れ が improve す る こ と が confirm さ れ た. One party で も と も と to think さ れ て い た, ALS モ デ ル マ ウ ス に お け る tubulin の overlap に off masato し て は, CRMP2 な ど の upper の シ グ ナ ル を western blot で quantitative し た が, メ カ ニ ズ ム を presumption で き る よ う な clear な results る を こ と が で き な か っ た. ま た す で に に 2023 designated し て い た god 経 cells の cell line や ラ ッ ト の god 経 cell primary cell を with い て, the in vitro に お け る, RGMa と cells bone dynamic の be を 験 department establish し つ つ あ る. Now, RGMa の stimulus が into り や す い cells swollen の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ て お り, SHSY や Neuro2A と い っ た god 経 cells の cell Line line を use し, RGMa で stimulus を い obscene の シ グ ナ ル を beg し 検 て い る が, usually の condition で は very な stimulus が into ら な い こ と が confirm さ れ た. Now, the ラット primary cell <s:1> establishes を rows を and 検 discussions である.

项目成果

Identification of double-stranded DNA in the cerebrospinal fluid of patients with acute neuromyelitis optica spectrum disorder

• DOI: 10.1016/j.jocn.2022.12.005
• 发表时间: 2023-01
• 期刊: Journal of Clinical Neuroscience
• 影响因子: 2
• 作者: Mamoru Yamamoto;T. Okuno;Jin-Lan Piao;Mikito Shimizu;K. Miyamoto;T. Nukui;M. Kinoshita;T. Koda;R. D. Haryuni;H. Mochizuki;T. Sugimoto;Y. Nakatsuji