小脳神経ネットワーク構造解析から探るApc遺伝子変異と統合失調症症状の関係解明

大腸癌抑制遺伝子として発見されたApc遺伝子は、大腸や脳(海馬,小脳)に多く発現している。Apc遺伝子変異と脳腫瘍発生との関連は証明されておらず、脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。これまでに研究代表者らは、脳に発現するApc遺伝子の癌抑制以外の機能を解明するために、癌が発生しない変異APC(APC1638T)を発現するAPC1638Tマウスを作製して、APC1638Tマウスは海馬神経細胞のシナプス形成と伝達に異常があり、統合失調症様行動を示すことを報告した。小脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。本研究では、APC1638Tマウス小脳における「三次元神経ネットワーク構造」と「APCとPSD-95（APC結合タンパク質）の局在」を調べて、APCとPSD-95の相互作用が小脳の三次元神経ネットワーク形成に与える影響を明らかにする。2022年度は、①研究協力者からのマウス提供予定の打合せ、②免疫染色で用いる抗体（抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体）の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。2022年度から2023年度までの間に、本研究で用いる生後8週齢のオスの野生型APCマウス（5匹）とAPC1638Tマウス（5匹）の小脳組織を、研究協力者の研究施設から提供いただけることになった。4%パラホルムアルデヒドで固定した野生型APCマウス小脳のパラフィン切片を用いて、抗APC抗体,抗MAP2抗体,抗体PSD-95抗体の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。抗原賦活条件として、Proteinase Kによる酵素処理、pH6のクエン酸バッファーによる加熱処理、pH8のEDTAによる加熱処理を検討した。抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体は、pH8のEDTAによる加熱処理が抗原を賦活させることが分かった。

大腸癌抑制遺伝子として発見されたApc遺伝子は、大腸や脳(海馬,小脳)に多く発現している。Apc遺伝子変異と脳腫瘍発生との関連は証明されておらず、脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。これまでに研究代表者らは、脳に発現するApc遺伝子の癌抑制以外の機能を解明するために、癌が発生しない変異APC(APC1638T)を発現するAPC1638Tマウスを作製して、APC1638Tマウスは海馬神経細胞のシナプス形成と伝達に異常があり、統合失調症様行動を示すことを報告した。小脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。本研究では、APC1638Tマウス小脳における「三次元神経ネットワーク構造」と「APCとPSD-95（APC結合タンパク質）の局在」を調べて、APCとPSD-95の相互作用が小脳の三次元神経ネットワーク形成に与える影響を明らかにする。2022年度は、①研究協力者からのマウス提供予定の打合せ、②免疫染色で用いる抗体（抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体）の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。2022年度から2023年度までの間に、本研究で用いる生後8週齢のオスの野生型APCマウス（5匹）とAPC1638Tマウス（5匹）の小脳組織を、研究協力者の研究施設から提供いただけることになった。4%パラホルムアルデヒドで固定した野生型APCマウス小脳のパラフィン切片を用いて、抗APC抗体,抗MAP2抗体,抗体PSD-95抗体の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。抗原賦活条件として、Proteinase Kによる酵素処理、pH6のクエン酸バッファーによる加熱処理、pH8のEDTAによる加熱処理を検討した。抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体は、pH8のEDTAによる加熱処理が抗原を賦活させることが分かった。