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小脳神経ネットワーク構造解析から探るApc遺伝子変異と統合失調症症状の関係解明

通过小脑神经网络结构分析阐明Apc基因突变与精神分裂症症状的关系

基本信息

批准号：
22K07626
负责人：
尾之内高慶
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Fujita Health University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

大腸癌抑制遺伝子として発見されたApc遺伝子は、大腸や脳(海馬,小脳)に多く発現している。Apc遺伝子変異と脳腫瘍発生との関連は証明されておらず、脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。これまでに研究代表者らは、脳に発現するApc遺伝子の癌抑制以外の機能を解明するために、癌が発生しない変異APC(APC1638T)を発現するAPC1638Tマウスを作製して、APC1638Tマウスは海馬神経細胞のシナプス形成と伝達に異常があり、統合失調症様行動を示すことを報告した。小脳に発現するApc遺伝子の機能はよく分かっていない。本研究では、APC1638Tマウス小脳における「三次元神経ネットワーク構造」と「APCとPSD-95（APC結合タンパク質）の局在」を調べて、APCとPSD-95の相互作用が小脳の三次元神経ネットワーク形成に与える影響を明らかにする。2022年度は、①研究協力者からのマウス提供予定の打合せ、②免疫染色で用いる抗体（抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体）の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。2022年度から2023年度までの間に、本研究で用いる生後8週齢のオスの野生型APCマウス（5匹）とAPC1638Tマウス（5匹）の小脳組織を、研究協力者の研究施設から提供いただけることになった。4%パラホルムアルデヒドで固定した野生型APCマウス小脳のパラフィン切片を用いて、抗APC抗体,抗MAP2抗体,抗体PSD-95抗体の染色条件（抗原賦活条件）の検討を行った。抗原賦活条件として、Proteinase Kによる酵素処理、pH6のクエン酸バッファーによる加熱処理、pH8のEDTAによる加熱処理を検討した。抗APC抗体,抗PSD-95抗体,抗MAP2抗体は、pH8のEDTAによる加熱処理が抗原を賦活させることが分かった。

Colorectal cancer suppressor gene is found in Apc gene, large intestine (hippocampus, small intestine) and many other genes. The relationship between Apc gene and tumor development proves that Apc gene functions differently. The representative of this study reported on the development of APC 1638T and its role in hippocampal neurogenesis and schizophrenia. The function of the Apc gene is to divide the gene into two parts. In this study, APC1638T was used to investigate the interaction between APC and PSD-95, and the influence of APC and PSD-95 on the formation and structure of three-dimensional neurogenesis. In 2022,(1) the research collaborator provided the predetermined binding conditions;(2) the immunostaining conditions (antigen activation conditions) for the antibodies (anti-APC antibody, anti-PSD-95 antibody, anti-MAP 2 antibody) were discussed. In 2022 and 2023, the wild-type APC (5) and APC1638T (5) were used in this study. The staining conditions (antigen activation conditions) for the anti-APC antibody, anti-MAP2 antibody and anti-PSD-95 antibody were discussed. Antigen activation conditions, enzyme treatment with Proteinase K, heat treatment with citric acid at pH6, and heat treatment with EDTA at pH8 were discussed. Anti-APC antibody, anti-PSD-95 antibody, anti-MAP-2 antibody, EDTA at pH8, heat treatment to activate antigen.