がん放射線治療後に起きる免疫応答経路の選択に関わる分子の探索

放射線治療後の抗腫瘍免疫反応を活性化させるために、治癒群と増悪群における免疫細胞を比較し、新たなターゲット分子を見出すために下記の実験を進めている。C57BL/6マウスの大腿皮下にGL261腫瘍細胞を移植した担癌マウスを作成し、腫瘍局所に10Gyの放射線を照射した後、2群に分け、一方に抗PD-1抗体を3回投与した。その後両群の頭蓋内に同じ腫瘍細胞を再移植した。両群から10日以上の間隔をあけて経時的に採血し、調製したPBMCを用いてシングルセルトランスクリプトーム解析を実施し遺伝子発現変化を解析している。さらに遺伝子発現変動がDNAのメチル化による制御を受けているかを確認するために、治癒群・増悪群から各1匹ずつ選択し、調製したPBMCを用いて、EM-Seq法によるDNAのメチル化解析を開始した。シングルセルトランスクリプトーム解析からは、腫瘍が縮小したマウスの腫瘍治癒後では、赤芽球の異常な増加が見られており、ヘモグロビン遺伝子発現の顕著な上昇が認められた。また、治癒群と増悪群を比較すると多くのリボソームタンパク質とAlas2、Eef2、Hspa8、Fam220a、Nacaなどの発現に違いが見られた。同じマウスの治療直後のPBMC解析では、腫瘍が縮小しつつあるマウスでは、まだ赤芽球の増加は見られておらず、両群間ではJund、Gnas、Arf6、Pcbp1などの遺伝子発現に違いが見られた。EM-Seqの結果については、現在解析を進めているところであるが、これまでのところ、トランスクリプトーム解析において発現に違いが認められた遺伝子について、DNAメチル化による制御を受けていると思われる遺伝子は見つかっていない。今後はシングルセルトランスクリプトーム解析で変化があった遺伝子等について、細胞を用いた機能解析を実施する予定である。

放射線治療後の抗腫瘍免疫反応を活性化させるために、治癒群と増悪群における免疫細胞を比較し、新たなターゲット分子を見出すために下記の実験を進めている。C57BL/6マウスの大腿皮下にGL261腫瘍細胞を移植した担癌マウスを作成し、腫瘍局所に10Gyの放射線を照射した後、2群に分け、一方に抗PD-1抗体を3回投与した。その後両群の頭蓋内に同じ腫瘍細胞を再移植した。両群から10日以上の間隔をあけて経時的に採血し、調製したPBMCを用いてシングルセルトランスクリプトーム解析を実施し遺伝子発現変化を解析している。さらに遺伝子発現変動がDNAのメチル化による制御を受けているかを確認するために、治癒群・増悪群から各1匹ずつ選択し、調製したPBMCを用いて、EM-Seq法によるDNAのメチル化解析を開始した。シングルセルトランスクリプトーム解析からは、腫瘍が縮小したマウスの腫瘍治癒後では、赤芽球の異常な増加が見られており、ヘモグロビン遺伝子発現の顕著な上昇が認められた。また、治癒群と増悪群を比較すると多くのリボソームタンパク質とAlas2、Eef2、Hspa8、Fam220a、Nacaなどの発現に違いが見られた。同じマウスの治療直後のPBMC解析では、腫瘍が縮小しつつあるマウスでは、まだ赤芽球の増加は見られておらず、両群間ではJund、Gnas、Arf6、Pcbp1などの遺伝子発現に違いが見られた。EM-Seqの結果については、現在解析を進めているところであるが、これまでのところ、トランスクリプトーム解析において発現に違いが認められた遺伝子について、DNAメチル化による制御を受けていると思われる遺伝子は見つかっていない。今後はシングルセルトランスクリプトーム解析で変化があった遺伝子等について、細胞を用いた機能解析を実施する予定である。