肝芽腫発生モデルを利用したエピゲノム異常がもたらす抗がん剤耐性機序の解明

使用肝母细胞瘤发育模型阐明表观基因组异常引起的抗癌耐药机制

基本信息

批准号：
22K07907
负责人：
本多昌平
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hokkaido University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07907/
关键词：
肝芽腫エピゲノム解析シスプラチン耐性 DNAメチル化異常 miRNA発現異常

项目摘要

【研究の目的】肝芽腫は小児肝悪性腫瘍でゲノム変異数が少なく、DNAメチル化・miRNA発現異常によるエピゲノム異常が腫瘍の発生進展に大きく関わる。臨床課題として主要な治療薬であるシスプラチン(CDDP)耐性獲得が問題であるが、その原因となる分子機構異常は明らかでない。本研究では、肝芽腫発生モデルを模倣して、iPS細胞由来肝芽細胞に特異的シグナルパスウェイの遺伝子発現導入をおこない肝芽腫細胞を誘導する。CDDP耐性を獲得した肝芽腫細胞のエピゲノムプロファイリングにより、耐性獲得に関わるメチル化およびmiRNA発現異常を同定する。遺伝子異常の蓄積が少ない肝芽腫細胞・臨床検体を研究対象とすることで、エピゲノム異常が直接的に抗癌剤耐性獲得に働く機序を探求することが可能と考えられ、他癌種に共通するドライバーとしてのエピゲノム異常を解明し新規治療法開発につながると期待される。【研究の成果】iPS細胞由来肝芽細胞より誘導した肝芽腫CDDP耐性細胞の解析ヒトiPS細胞由来iCell Hepatoblast(FUJIFILM)を用いて肝細胞へと分化する過程において、変異型βカテニン(S37A)遺伝子および変異型YAP(S127A)遺伝子発現プラスミドを導入した。表現型の変化が確認され、Wnt・Hippoパスウェイに関連する遺伝子のmRNAおよび蛋白発現の変動をqRT-PCRおよびWB法にて解析した。肝芽腫が誘導できたかの同定には発現プロファイリングによるGSEA解析が必要と判断し、現在上記遺伝子導入細胞の確立とサンプル採取に向けたin vitro解析を進行中である。

[研究目的]肝母细胞瘤是一种儿科肝恶性肿瘤，具有少量的基因组突变，由于异常DNA甲基化和miRNA表达而引起的表观基因组异常与肿瘤发育非常重要。一个临床问题是获得对顺铂（CDDP）的抗性，这是主要的治疗剂，但导致这种情况的分子机制的异常尚不清楚。在这项研究中，我们通过将特定信号途径的基因表达引入IPS细胞衍生的肝母细胞中，模仿肝母细胞瘤发育模型并诱导肝母细胞瘤细胞。 CDDP抗肝细胞细胞的表观基因组分析确定甲基化和miRNA表达异常，涉及抗药性的获得。通过研究基因异常积累的肝母细胞瘤细胞和临床标本，人们认为，可以探索表观遗传组异常直接可获得抗癌耐药性的机制，并且可以预期，这将阐明像驾驶员一样，这些驾驶员像驾驶员一样，是针对其他癌症类型的开发，即开发出来的，这是癌症的开发。 [研究结果]在使用人IPS细胞衍生的ICELL ICELL ICELL HEPATOBLAST（FUJIFILM），突变的β-Catenin（S37A）基因和突变的Yap（S127A）介绍的型含量（fujifilm）中，对IPS细胞衍生的肝类母细胞诱导的肝类母细胞分析。证实了表型变化，并通过QRT-PCR和WB方法分析了与Wnt-Hippo途径相关的基因的mRNA和蛋白质表达的变化。我们已经确定必须通过表达分析来确定是否可以诱导肝母细胞瘤来分析GSEA分析，并且目前正在进行体外分析以建立基因转染的细胞和样品收集。