Development of AAV vector for in vivo treatment for congenital adrenal hyperplasia

用于体内治疗先天性肾上腺增生症的 AAV 载体的开发

• 批准号: 22K07950
• 负责人: 内木 康博
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: National Center for Child Health and Development
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07950/
• 关键词: 先天性副腎皮質過形成症; 遺伝子治療; アデノウィルス随伴ウィルスベクター; 21水酸化酵素欠損症; P450チトクロームオキシダーゼ; 先天性副腎皮質過形成

本研究の目的は、先天性副腎皮質過形成（CAH）に対するin vivo遺伝子治療のための治療効果の高いアデノ随伴ウィルス(AAV)ベクターを開発することである。これまでに我々を含めCAHに対するAAVベクターを用いた遺伝子治療を開発してきたが、得られる酵素活性や効果持続期間において十分なベクター系が構築されていない。本研究期間では組織特異的プロモーターにより補酵素と共発現することでより高い治療効果を得られるAAVベクターを作成する。22年度はCyp21a1を含みCMVプロモーターを有する血清型9型AAV（AAV9-Cyp21a1）ベクターと同じくPorを含んだ血清型9型AAV（AAV9-Por）ベクターを作成した。これを等量混合して21水酸化酵素欠損症モデルマウス大腿に筋肉内投与を行い、投与前と4週後にマウス血清中のプロゲステロン(P4)とデオキシコルチコステロン(DOC)濃度をLC-MS/MSで測定した。AAV9-Cyp21a1とAAV9-Porを筋肉内導入したマウス血清中のP4/DOCの低下を認めた。ただし改善の程度はCyp21a1を含んだ血清型2型AAVベクター投与後と同程度であった。マウス筋肉中にはPorが多く発現していると考えられることからPor遺伝子を混合導入する事による効果に違いはかなったと考えられる。21水酸化酵素欠損症においてAAVベクターを用いた筋肉内への遺伝子導入の治療効果は補酵素遺伝子を混合導入しても改善を認めなかった。あと今年度にCMVプロモーターおよび副腎特異的Sf1プロモーターを用いた11β水酸化酵素とその補酵素の遺伝子を結合させたAAVベクターを作成した。次年度以降に補酵素との結合遺伝子をAAVベクターに投与した効果を検証する予定である。

Purpose this study の は, congenital adrenal cortex form (CAH) に す seaborne る in vivo heritage 伝 son treatment の た め の treatment services high の い ア デ ノ with companion ウ ィ ル ス (AAV) ベ ク タ ー を open 発 す る こ と で あ る. こ れ ま で に I 々 を containing め CAH に す seaborne る AAV ベ ク タ ー を with い た heritage 伝 son treatment を open 発 し て き た が, ら れ る enzyme activity や unseen during fruit hold 続 に お い て very な ベ ク タ ー department が build さ れ て い な い. During this study で は tissue specific プ ロ モ ー タ ー に よ り repair enzyme と 発 now total す る こ と で よ り high い treatment services fruit を ら れ る AAV ベ ク タ ー を made す る. Contains 22 year は Cyp21a1 を み CMV プ ロ モ ー タ ー を have す る AAV serotype 9 type (AAV9 Cyp21a1 ベ ク タ ー と with じ く Por を containing ん だ AAV serotype 9 type (AAV9 - Por) ベ ク タ ー を made し た. こ れ を equivalent mixed し て 21 acidic enzyme owe loss disease モ デ ル マ ウ ス thigh に brawn with を い shots in と before and 4 weeks after に マ ウ ス serum の プ ロ ゲ ス テ ロ ン (P4) と デ オ キ シ コ ル チ コ ス テ ロ ン (DOC) concentration determination を LC - MS/MS で し た. AAV9 - Cyp21a1 と AAV9 - Por を brawn to import し た マ ウ ス serum の P4 / DOC の low を recognize め た. The degree of improvement of the ただ lesion is ただ Cyp21a1を containing んだ serotype 2 AAVベ タ タ ただ after administration is と to the same extent as であった. マ ウ ス dread of に は Por が more く 発 now し て い る と exam え ら れ る こ と か ら Por posthumous son 伝 を mixed import す る matter に よ る unseen fruit に violations い は か な っ た と exam え ら れ る. 21 acidic enzyme owe loss disease に お い て AAV ベ ク タ ー を with い た dread within へ の heritage 伝 son import の treatment services fruit は repair enzyme heritage 伝 son を mixed import し て も improve を recognize め な か っ た. あ と our に CMV プ ロ モ ー タ ー お よ び adrenal gland specific Sf1 プ ロ モ ー タ ー を with い た 11 beta acidic enzyme と そ の repair enzyme の heritage 伝 son を combining さ せ た AAV ベ ク タ ー を made し た. Annual in に repair enzyme と の combined heritage 伝 son を AAV ベ ク タ ー に cast with し た unseen fruit を 検 card す る designated で あ る.

项目成果

Gene therapy for CAH with AAV vectors into fibroblasts, iPS cells and model mice

使用 AAV 载体对成纤维细胞、iPS 细胞和模型小鼠进行 CAH 基因治疗

• 发表时间: 2022
• 作者: Naiki Y;Miyado M;Horikawa R;Katsumata N;Takada S;Akutsu H;Onodeara M;Fukami M
• 通讯作者: Fukami M

Adeno-associated virus-mediated gene therapy for patient's fibroblasts, induced pluripotent stem sells, and a mouse model of congenital adrenal hyperplasia

腺相关病毒介导的对患者成纤维细胞、诱导多能干细胞和先天性肾上腺增生小鼠模型的基因治疗

• DOI: 10.1089/hum.2022.005
• 发表时间: 2022
• 期刊: Human Gene Therapy
• 影响因子: 4.2
• 作者: Naiki Y;Miyado M;Shindo M;Horikawa R;Hasegawa Y;Katsumata N;Takada S;Akutsu H;Onodera M;Fukami M
• 通讯作者: Fukami M

Effect of a coenzyme in gene therapy for 21-hydroxylase deficiency with AAV vector into a model mouse

辅酶在 AAV 载体基因治疗模型小鼠 21-羟化酶缺陷中的作用

• 发表时间: 2023
• 作者: Naiki Y;Miyado M;Horikawa R;Katsumata N;Fukami M
• 通讯作者: Fukami M

AAVベクターによる11β水酸化酵素欠損症の遺伝子治療モデル作成

使用 AAV 载体创建 11β-羟化酶缺乏症的基因治疗模型

• 发表时间: 2022
• 作者: 内木康博;宮戸真美;堀川玲子;阿久津英憲;勝又規行;深見真紀
• 通讯作者: 深見真紀