The study about the mechanism of postmenopausal non-alcoholic steatohepatitis using single-cell RNA sequencing

单细胞RNA测序研究绝经后非酒精性脂肪性肝炎发病机制

• 批准号: 22K07963
• 负责人: 田中 正剛
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07963/
• 关键词: 非アルコール性脂肪肝炎; NASH; 閉経; エストロゲン; クッパー細胞; マクロファージ; 肝星細胞; 一細胞遺伝子発現解析; 閉経後

非アルコール性脂肪肝炎 (non-alcoholic steatohepatitis; NASH) は肝脂肪化を基盤として、炎症・線維化が起きる病態であるが、その発症機序はまだ十分には解明されていない。NASHの有病率には性差が存在し、女性は閉経前には男性より有病率が低いが、閉経後には男性と同程度となることが知られており、閉経による内因性エストロゲンの減少がNASH発症を促進すると考えられている。しかし、エストロゲンのマクロファージや肝星細胞等の非実質細胞に対する作用については不明な点が多い。そこで野生型マウスおよびMC4R欠損雌性マウス7週齢に両側卵巣摘出術（対照群としてシャム手術）を行い、その1週間後より高脂肪・高コレステロール食を20週間負荷し、閉経後NASHマウスを作製した。体重、肝重量、肝酵素、NAFLD activity score、Fibrosis scoreともMC4R欠損雌性マウスに両側卵巣摘出術を施行した群（閉経後NASH群）で有意に増加を認めた。Whole liverを用いたマイクロアレイによる遺伝子発現解析を行い、パスウェイ解析において閉経後NASH群で細胞外マトリクス受容体相互作用、Focal adhesion経路、PI3-Aktシグナル経路、サイトカイン・ケモカインシグナル経路の遺伝子発現が有意に亢進していた。また、コラゲナーゼ灌流法により肝臓から非実質細胞を分離し、フローサイトメトリーにてCD45陽性細胞をF4/80とCD11bで展開し、組織常在性のマクロファージ(F4/80 high, CD11b low)と骨髄由来のマクロファージ(F4/80 low, CD11b high)の分画の割合を検討したところ、閉経後NASH群では、卵巣摘出を行なったマウスにおいて、骨髄由来のマクロファージ分画の増加と組織常在性のマクロファージ分画の低下を認めた。

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）是一种病理状况，其中炎症和纤维化是基于肝脏脂肪变性而发生的，但尚未完全了解其发作的机制。纳什（Nash）的患病率存在​​性别差异，女性的患病率低于更年期的男性，但已知与更年期后的男人相似，因此人们认为，更年期引起的内源性雌激素减少将促进纳什的发展。但是，关于雌激素对巨噬细胞和肝星状细胞等非核细胞的影响有许多未知数。因此，在野生型小鼠和MC4R缺陷型雌性小鼠的7周龄时进行双侧卵巢切除术（假手术为对照组），此后一周，将高脂，高胆固醇饮食施用20周，以产生绝经后Nash小鼠。体重，肝脏重量，肝酶，NAFLD活性评分和纤维化评分均显示出在具有MC4R缺陷型（绝经后NASH组）的雌性小鼠中进行双侧卵巢切除术的显着增加。使用整个肝脏使用微阵列进行基因表达分析，在途径分析中，细胞外基质受体相互作用的基因表达，局灶性粘附途径，PI3-AKT信号途径以及细胞因子 - 化学化学运动学信号途径的基因表达显着增加。此外，通过胶原酶灌注方法从肝脏中分离出非副作用细胞，并通过流式细胞仪使用F4/80和CD11b开发CD45阳性细胞，以及组织居住的巨噬细胞（F4/80 High，cd，CDCD LOW）和骨骨髓摩尔噬细胞（F4/80 High）的馏分（F4/80 high）的含量（F4/80 High）（f4 shige）cddredived-dredived-dredived-80 low，CD11b。在绝经后NASH组中，骨髓衍生的巨噬细胞分数的增加，并且在卵巢切除术的小鼠中，骨髓衍生的巨噬细胞分数降低。

项目成果

肝非実質細胞に注目した閉経後NASHの発症・増悪メカニズムの解析

以肝非实质细胞为中心分析绝经后NASH发病及加重机制

• 发表时间: 2022
• 作者: 青柳知美;鈴木秀生;高橋基;井本効志;東夕喜;大野あかり;黒川美穂;田代茂樹;合谷孟;田中正剛;国府島庸之;小川佳宏
• 通讯作者: 小川佳宏

NASH関連肝癌モデルマウスを用いた抗PD-1抗体の肝癌に対する効果についての検討

使用NASH相关肝癌模型小鼠检查抗PD-1抗体对肝癌的作用

• 发表时间: 2022
• 作者: 高橋基;国府島庸之;東夕喜;大野あかり;青柳知美;井本効志;黒川美穂;田代茂樹;合谷孟;田中正剛;小川佳宏
• 通讯作者: 小川佳宏