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Analysis of plasma kallikrein-dependent TGF-beta activation and liver fibrosis using the knock-in-mice

使用敲入小鼠分析血浆激肽释放酶依赖性 TGF-β 激活和肝纤维化

基本信息

批准号：
22K08067
负责人：
古谷裕
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08067/
关键词：
肝線維化肝がん TGF-β ノックインマウス血漿カリクレイン

项目摘要

TGF-βの活性化は肝線維化や肝がんの進行に関与しており、この活性化機構を解明することが重要である。我々は初期の肝線維化においてセリンプロテアーゼである血漿カリクレイン(PLK)によるTGF-β前駆体であるLAPの切断がTGF-β1の活性化を誘導することを見出している。しかしながらPLK依存的なTGF-β1活性化がどの様に肝線維化に関与しているのか明らかとなっていない。そこで当課題ではPLKによるLAP切断部位Arg58, Leu59に変異を導入し切断できない配列を持つノックインマウスをライン化し、肝線維化モデルを作製し、ノックインマウスと野生型マウスを比較することによりPLK依存的なTGF-β1活性化の役割を明らかにすることを目的として研究を行った。CRISPR/Cas9システムを用いて、TGF-β1 LAPの血漿カリクレイン切断サイトであるArg58, Leu59から、切断できないAla58, Ala59をコードする遺伝子配列に組換えたノックインマウスを作製し、変異の生殖系列への移行を確認した。このマウスのライン化を実施した。このTGF-β1ノックインマウスと野生型マウスを用いて胆管結紮による肝線維化モデルを作製し、胆管結紮（BDL）3日後と13日後に血漿中のALTとAST量とLAP-D量を測定した。肝切片を作製し、シリウスレッド染色を行い肝線維化領域を染色した。野生型マウスの血漿中ではBDL後13日目でLAP-Dの上昇が見られたが、ノックインマウスの血漿中で検出できなかった。また、血漿中のALT, ASTが野生型マウスと比較してノックインマウスではBDL後13日目で有意に抑制されたが、３日目では抑制されなかった。肝切片をシリウスレッド染色した結果、BDL後13日目で野生型マウスと比較してノックインマウスでは肝線維化が抑制される傾向があった。

The activation of TGF-β is related to the progress of the liver line dimensionalization and the activation mechanism of TGF-β. I am an early stage liver line dimensionalization of liver line dimensionalization (PLK). The TGF-β precursor body is cut off by LAP, and the activation of TGF-β1 is induced and the result is visible.しかしながらPLK-dependent activation of なTGF-β1 がどの様に liver line dimensionalization and しているのか明らかとなっていない.そこで本事ではPLKによるLAP cutting part Arg58, Leu59に変different importしcutoffできない配arrayをholdつノックインマウスをライン化し, liver line dimensionalization モデルをproduced し, ノックインマウスComparison of the wild-type Masato PLK-dependent activation of TGF-β1 and the results of the study. CRISPR/Cas9 uses いて, TGF-β1 LAP, plasma カリクレイン cuts サイトであるArg58, Leu59から, cuts できないAla58, Ala59 をコードする伝子array set replacement えたノックインマウスを production し、変different reproductive series への行をconfirmed した.このマウスのライン化を実士した.このTGF-β1 ノックインマウスとwild type マウスを is produced by いて bile duct ligation and liver line dimensionalization モデルをし. The amount of ALT, AST and LAP-D in plasma were measured 3 days after bile duct ligation (BDL) and 13 days later. Liver sections were prepared and stained, and liver line dimensional areas were stained. 13 days after the release of wild-type BDL in the plasma, the LAP-D levels increased, and the levels of LAP-D in the plasma were reduced.また、ALT in plasma, AST's wild-type マウスと comparison してノックインマウスではBDL after 13 days of intentional suppression of でにされたが, 3 days of では suppression of されなかった. Liver section Stain staining results, wild-type results 13 days after BDLスとComparisonしてノックインマウスではLiver line dimensionizationがSuppressionされる tendenciesがあった.