Examination of the effect of combination therapy of galectin-9 and epigallocatechin gallate on hepatocellular carcinoma

半乳糖凝集素9与表没食子儿茶素没食子酸酯联合治疗肝细胞癌的疗效观察

• 批准号: 22K08078
• 负责人: 正木 勉
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kagawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08078/
• 关键词: エピガロカテキンガレート; 肝細胞癌; 抗がん作用; 分子標的治療薬; 耐性株; ガレクチン-9; microRNA

緑茶に含まれるエピガロカテキンガレート（以下：EGCG）は疫学的に癌の発生予防効果が報告されており、ある種の癌細胞の抑制効果も報告されている。しかしながら肝癌の分子標的治療薬Lenvatinib、Sorafenib耐性癌細胞株に対するEGCGの効果は明らかではない。そのような耐性癌細胞を含む肝癌細胞株におけるEGCGの抗腫瘍効果について基礎的解析をした。【方法】（１）2種類の肝癌細胞株HuH-7、Hep3Bを用いて培養液中にLenvatinib、Sorafenibの濃度を1μMから10μMまで添加した。生存細胞のみをセレクションし、耐性肝癌細胞株を作成しIC50値の薬剤濃度を確認した。（２）耐性株におけるEGCGの細胞増殖抑制効果をMTT assayで解析した。（３）EGCGの抗腫瘍作用の効果に関連するmicroRNAを2563遺伝子が搭載されたアレイチップを用い網羅的に解析した。さらにLenvatinib、Sorafenib耐性肝癌細胞株Hep3Bをヌードマウスの皮下に移植し、EGCGを腹腔内に投与し、抗腫瘍効果を検討した。【成績】Hep3Bの野生株及びLenvatinib耐性株における48時間後のIC50値はそれぞ4.0μM、92.7μMであった。またHep3Bの野生株及びSorafenib耐性株ではそれぞれ2.0μM、11.4μMであり、それぞれの薬剤の耐性株を樹立した。Hep3B全ての細胞株においてEGCGの濃度依存的に細胞増殖抑制効果を示した。しかしながらHuH-7においては効果を示さなかった。また、EGCG投与前後にHep3BのmicroRNAは明瞭なクラスターを形成し、EGCG投与により抗腫瘍効果に関連するmicroRNA分子を見いだした。In vivoの解析においてもLenvatinib、Sorafenib耐性株に対する抗腫瘍効果を示した。

Green tea contains EGCG (EGCG), which is a report on the prevention of cancer development in epidemiology and the inhibition of cancer cells in vitro. The effect of EGCG on Lenvatinib and Sorafenib resistant cancer cell lines is obvious. The basic analysis of EGCG's anti-tumor effect on resistant cancer cells, including hepatoma cell lines [Methods](1) Lenvatinib and Sorafenib were added at concentrations ranging from 1μM to 10μM in the culture medium of two hepatoma cell lines HuH-7 and Hep3B. The IC50 value of the surviving cells and the concentration of the resistant liver cancer cells were determined. (2) The MTT assay was used to analyze the inhibitory effect of EGCG on cell proliferation of resistant strains. (3) Analysis of microRNA related to the anti-tumor effect of EGCG using the 2563 gene on board the Aliexpress. In addition, Lenvatinib and Sorafenib resistant hepatoma cell lines Hep3B were transplanted subcutaneously and EGCG was administered intraperitoneally to investigate their anti-tumor effects. The IC50 values of Hep3B wild and Lenvatinib resistant strains after 48 hours were 4.0μM and 92.7μM respectively. The wild strain of Hep3B and the resistant strain of Sorafenib were established at 2.0μM and 11.4μM respectively. The effect of EGCG on proliferation of Hep3B cell line was demonstrated. The HuH-7 is the first to show off its effects. EGCG administration and Hep3B microRNAs have been shown to be involved in the formation of tumor cells. In vivo analysis of Lenvatinib and Sorafenib resistant strains against tumor resistance