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冠攣縮性狭心症の成因における血管平滑筋収縮の情報伝達系の役割の解明

阐明血管平滑肌收缩信号转导系统在血管痉挛性心绞痛发病机制中的作用

基本信息

批准号：
22K08145
负责人：
渋谷修司
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08145/
关键词：
冠攣縮性狭心症 iPS細胞

项目摘要

2022年度は、まず、冠攣縮性狭心症の重症例の患者３例の血液または線維芽細胞を採取し、これらの細胞にNucleofector２Bを使用してエレクトロポレーションを行い、初期化に必要な遺伝子を導入しiPS細胞を樹立した。そして、安定して維持培養が可能になった株について、血管平滑筋の分化誘導を行い、分化誘導率の高い株をピックアップし、それらに核型検査を行い染色体異常がないことを確認した。そのiPS細胞をCHIR99021、BMP4を作用させ中胚葉を分化させ、PDGF-BB、ActivinAを作用させて、血管平滑筋に分化誘導させた。ASMA、SM22αなどの血管平滑筋特異的マーカーをqPCR、フローサイトメトリー、免疫染色などで評価することで、血管平滑筋細胞に分化誘導されていることを確認した。また、iPS細胞をCHIR99021、BMP4を作用させ中胚葉を分化させ、VEGFとforskolinを作用させて、CD144陽性の血管内皮細胞を誘導し、フローサイトメトリーにてそれらの細胞をソートできることを確認した。そして、分化誘導した血管平滑筋細胞のベースラインでの細胞内カルシウム濃度を計測し、アセチルコリンを投与しその細胞内最大増加カルシウム濃度を計測しコントロール群と比較、ベースラインでの細胞内カルシウム濃度はコントロール群と有意な差がなかったが、アセチルコリン投与後の細胞内最大増加カルシウム濃度は冠攣縮性狭心症群で有意に高くなることを確認した。

In 2022, 3 patients with severe coronary contracture heart disease were selected for blood cell collection, and Nucleofector2B was used for cell culture, initialization, and introduction of essential genes into iPS cells. It was confirmed that it was possible to maintain culture in a stable and stable manner, induce differentiation of smooth blood vessels, increase the differentiation induction rate of high plants, and conduct karyotype analysis to confirm the existence of chromosomal abnormalities. CHIR99021, BMP4, mesoblast differentiation, PDGF-BB, Activin A, vascular smooth muscle differentiation ASMA, SM22 α, and vascular smooth muscle cell differentiation induction were confirmed by qPCR, immunostaining, and immunostaining. CHIR99021, BMP4, CD144-positive vascular endothelial cells Measurement of intracellular cell concentration in vascular smooth muscle cells induced by differentiation, cell population comparison, cell population comparison, and intentional differentiation The maximum increase in intracellular concentration after administration of the drug was confirmed by the intentional increase in coronary contracture syndrome.