ヒト多能性幹細胞からの効率的な心筋細胞分化に向けた新規低分子化合物の開発

开发新型低分子量化合物，用于从人多能干细胞中有效分化心肌细胞

• 批准号: 22K08164
• 负责人: 岸野 喜一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08164/
• 关键词: 再生医療; ヒトiPS細胞由来心筋細胞; BMPシグナル; 低分子化合物

①in silicoパイロットスクリーニングで選出した候補化合物の有効性評価約80万個の化合物データベースライブラリーから，標的因子の構造に基づいたpharmacophore及びドッキングスコアを用いて行ったパイロットスクリーニングにより選出された候補化合物の有効性評価を行った。評価系としては，ヒト細胞株HEK293とBMPシグナル下流遺伝子Id-1プロモーターを有する既知のBMP反応性ルシフェラーゼベクターを用いたルシフェラーゼアッセイ及びヒトiPS細胞の心筋分化誘導系を用いた。実際に選出した低分子化合物を添加し，FACS，PCR，免疫染色などを用いて定量的に評価した。ヒトiPS細胞に同定した化合物を添加した結果, BMPシグナル下流遺伝子のId-1の発現増加を認め, 心筋細胞への分化系においてはトロポニンT陽性細胞の増加を認めた。②in silicoフルスクリーニングによる候補化合物の選出パイロットスクリーニングで得られた候補化合物の有効性評価結果を踏まえて，さらに低濃度で効果の高い化合物を選出する為，大規模化合物データベースを用いたin silicoフルスクリーニングを行った。具体的には，化合物の化学構造式と①で得られたBMPシグナル相対活性値から，ソフトウェアAutoQSARを用いて，定量的構造活性相関式の算出を行い，約800万個の化合物を含むライブラリーから，さらに高い効果を示し，かつリード化合物の条件を備えた化合物を選出した。次に，パイロットスクリーニング時同様に，選出された候補化合物と標的因子ドメインとのドッキングスコアを算出し，GBVI/WSA_dGを用いた結合親和性の評価をin silicoで行い，50個の候補化合物を選出した。ヒト細胞株HEK293を用いたBMP反応性ルシフェラーゼアッセイで候補化合物の有効性を定量的評価し、絞り込みを実施している。

(1) the in silico パ イ ロ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ で elected し た alternate compound の about 800000 の compounds have sharper sex review 価 デ ー タ ベ ー ス ラ イ ブ ラ リ ー か ら, The underlying factor の に basis づ い た pharmacophore and び ド ッ キ ン グ ス コ ア を with い て line っ た パ イ ロ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ に よ り elected さ れ の た alternate compounds have sharper sex review 価 を line っ た. Review 価 department と し て は, ヒ ト cell line HEK293 と BMP シ グ ナ ル dirty legacy 伝 son Id 1 プ ロ モ ー タ ー を have す る already know の BMP anti 応 sex ル シ フ ェ ラ ー ゼ ベ ク タ ー を with い た ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ and び ヒ ト iPS cells の heart muscle differentiation induction of を use い た. Be interstate に elected し た add し を low molecular compounds, both FACS, PCR, immune dyeing な ど を with い て に of quantitative evaluation of 価 し た. ヒ ト に iPS cells might be し た compound を added し た results, BMP シ グ ナ ル dirty legacy 伝 son の Id 1 の 発 now rights を め, heart muscle cells へ の differentiation is に お い て は ト ロ ポ ニ の raised plus を ン T positive cells to recognize め た. (2) the in silico フ ル ス ク リ ー ニ ン グ に よ の る alternate compounds selected パ イ ロ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ で have ら れ の た alternate compounds have sharper sex evaluation results 価 を tread ま え て, さ ら に low concentration could promote behavior high の い で compound を elected す る for, Large-scale compound デ ー タ ベ ー ス を with い た in silico フ ル ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. Specific に は, compound type と の chemical structure (1) で have ら れ た BMP シ グ ナ ル phase on activity of seaborne numerical か ら, ソ フ ト ウ ェ ア AutoQSAR を with い て, quantitative structure activity phase masato type の calculate を い, about 8 million を の compounds containing む ラ イ ブ ラ リ ー か ら, さ ら に high い unseen fruit を し, Youdaoplaceholder3 リ リ ド ド ド compound <s:1> conditions を prepare えた compound を select た た. に, パ イ ロ ッ ト ス ク リ ー ニ ン グ with others when に, choose さ れ た alternate compound と underlying factor ド メ イ ン と の ド ッ キ ン グ ス コ ア を calculate し, GBVI/WSA_dG を with い た combined with affinity の review 価 を in silico で い, 50 を の alternate compounds selected し た. ヒ ト cell line HEK293 を with い た BMP anti 応 sex ル シ フ ェ ラ ー ゼ ア ッ セ イ の で alternate compounds have sharper sex を quantitative evaluation 価 し, twisted り 込 み を be applied し て い る.

项目成果

Recurrent pulmonary thrombosis after balloon pulmonary angioplasty in chronic thromboembolic pulmonary hypertension

慢性血栓栓塞性肺动脉高压球囊肺动脉成形术后复发性肺血栓

• DOI: 10.1093/eurheartj/ehac419
• 发表时间: 2022
• 期刊: European Heart Journal
• 影响因子: 39.3
• 作者: Tomohiko C Umei;Yoshikazu Kishino;Takashi Kawakami;Keiichi Fukuda
• 通讯作者: Keiichi Fukuda