肺動脈性肺高血圧症の内皮間葉分化転換におけるDNA損傷応答とTGF-βの役割

DNA损伤反应和TGF-β在肺动脉高压内皮间质转分化中的作用

• 批准号: 22K08212
• 负责人: 杉本 浩一
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08212/
• 关键词: 肺高血圧; DNA損傷; 内皮間葉移行; TGF-β; 血管内皮細胞

2022年度は、VEGF阻害薬SUGEN5416（20 mg/日）を投与した上で低酸素（10%）に曝露することで肺高血圧モデルマウスを作成し(Sugen-Hypoxia群)、対象マウス(normoxia群）と以下の項目について比較を行った。①右室圧、②右室肥大（右室・左室重量比）、③肺動脈内膜肥厚、④肺毛細血管の筋性化、⑤DNA損傷応答の活性化（γH2AX（二本鎖切断））、⑥TGF-β 発現（血中TGF-β濃度、SMAD2/3 リン酸化）。結果：Sugen-Hypoxia群において、2週目から3週目に右室圧の上昇と右室肥大が認められた。肺組織に対するαSMAの免疫染色の結果、Sugen-hypoxia群では肺細動脈レベルでの中膜肥厚が見られたほか、特に毛細血管レベルの筋性変化が著明であった。また、本研究では内膜肥厚や叢状変化は認められなかった。蛍光免疫染色により、γH2AXが肺動脈内皮細胞の核内においても、平滑筋と同等に認めっれることが明らかとなった。ウエスタンブロットにより肺組織全体のγH2AXの発現量を比較すると、Sugen-Hypoxia群で有意に増加していることが示された。また、Smad2, リン酸化Smad2の局在を蛍光免疫染色で確認すると、Smad2は肺動脈においては中膜よりも内膜側に強く発現する傾向がみられた。ウエスタンブロットの結果、肺組織のSmad2のリン酸化はSugen Hypoxia群において亢進していた。一方、雌マウスにおいてはSugen-Hypoxia群の3週目にTGFβが上昇している傾向が見られたが、統計学的有意差は認められなかった。今回の実験では、Smad2やDNA損傷のマーカーとなるγH2AXは、Sugen-Hypoxia群においてnormoxia群よりも上昇しており、我々の仮説に矛盾しない結果となった。

In 2022, the VEGF inhibitor SUGEN5416 (20 mg/day) was administered to patients exposed to hypoxia (10%) and pulmonary hypertension (Sugen-Hypoxia group).① right ventricular pressure, ② right ventricular hypertrophy (right ventricular: left ventricular weight ratio), ③ pulmonary artery intima hypertrophy, ④ pulmonary capillary tendinization, ④ activation of DNA damage response (γ H2AX (two-lock disconnection)), ④ TGF-β expression (TGF-β concentration in blood, SMAD2/3 acidification). Results: Sugen-Hypoxia group was found to be associated with increased right ventricular pressure and hypertrophy at 2 weeks and 3 weeks. Immunostaining results for αSMA in lung tissues, Sugen-hypoxia group, mesangial hypertrophy in pulmonary arterioles, and muscular degeneration in particular capillaries were observed. In this study, the intimal hypertrophy and clustering were identified. Immunostaining for γ-H2AX in the nucleus of pulmonary endothelial cells The expression of γ H2AX in the whole lung tissue was compared with that in the Sugen-Hypoxia group, which was intentionally increased. Smad2, Smad2, Smad It is the result of Smad2 acidification in lung tissue and the hyperactivity of Sugen Hypoxia. A side, female, middle, three week group, TGFβ, increase, statistical, intentional, negative. This time around, Smad2 and DNA damage are increasing, and Sugen-Hypoxia groups are increasing.