Analysis of primary ciliary dyskinesia using conditional reprogramming culture

使用条件重编程培养分析原发性纤毛运动障碍

• 批准号: 22K08244
• 负责人: 近藤 光子
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08244/
• 关键词: 原発性線毛機能不全症; 線毛細胞; 細胞培養; 線毛運動; cilia; airway epithelium; air-liquid interface; cell culture; bronchiectasis

原発性線毛機能不全症（Primary ciliary dyskinesia; PCD）の診断は、遺伝子検査、鼻腔NO、線毛の電子顕微鏡による構造異常、高速ビデオを用いた線毛運動異常など複数の検査を用いて確認することが望まれている。しかし、線毛自体の解析は感染などによる線毛の２次的損傷後の異常との鑑別が問題になる。そのため培養細胞を用いることが海外では推奨され、欧州呼吸器学会のガイドラインにも取り上げられている。しかし、希少疾患のためもあり、本邦での培養細胞を用いた検討はほとんどなされていなかった。一方、気道上皮細胞の初代培養は、継代後の細胞増殖には限界がある。特に、疾患気管支から採取したPCDの気道上皮細胞は培養成功率が低い点も問題となっている。これらを解決するために、本研究ではConditional Reprogramming(CRC)法を用いて培養、解析することを目的とした。本年度は、PCD疑い症例に気管支鏡生検を行い、生検組織をプロテアーゼ処理で、上皮細胞を単離し、CRC法を用いて基底細胞を増殖させた。その後、これをTranswellに蒔き、コンフルエンスの後にAir-liquid interface法に置換して、更に１ヶ月にわたって培養を継続した。その結果、線毛細胞への分化を位相差顕微鏡で確認でき、さらに線毛の電顕、蛍光免疫染色、高速ビデオ撮影を実施中である。また線毛細胞が密集した部分ではパーティクルを載せて、その移動を追跡して粘液線毛クリアラスシステムも検討中である。臨床所見や遺伝子変異との関連づけを行い、一部の症例で遺伝子変異による線毛運動異常の違いを確認している。

Diagnosis of Primary ciliary dysplasia (PCD), genetic examination, nasal NO, structural abnormalities in hair microscopes, high speed vidicon, abnormal hair movement, multiple examinations, and confirmation. There is a problem in analyzing the hair itself and identifying abnormalities after the second injury of the hair. The European Society for Respiratory Medicine has been established in 1998. We hope that the disease will be cured and the cultured cells in our country will be cured. The primary culture and proliferation of epithelial cells in one side and one side are limited. The success rate of culture of epithelial cells in PCD was low. This study is based on Conditional Reprogramming(CRC). This year, PCD-related cases were examined by microscopy, and the epithelial cells were cultured by CRC. After a long period of time, we will continue to improve the quality of our products. The results showed that the differentiation of hair cells was confirmed by phase contrast microscopy, and the electroporation of hair cells was confirmed by fluorescence immunostaining and high-speed photography. The hair cells are dense, and the movement of the hair cells is tracked. The clinical findings include: variation in the number of cases; abnormal movement of hair; and confirmation of abnormal movement.

项目成果

DRC1変異を認め多面的解析を行った原発性線毛機能不全症の１例

DRC1突变原发性纤毛功能障碍一例及多方面分析

• 发表时间: 2022
• 作者: 黒川敦志;近藤光子;本多奈穂子;阿部和大;辻真世子;赤羽朋博;有村健;八木理充;武山廉;桂秀樹;多賀谷悦子
• 通讯作者: 多賀谷悦子

当院における線毛機能不全症候群の診断プロセスと臨床像の解析

我院纤毛功能障碍综合征的诊断流程及临床表现分析

• 发表时间: 2023
• 作者: 近藤光子;黒川敦志;辻真世子;折茂真実;三好梓;小林文;有村健; 八木理充;桂秀樹;多賀谷悦子
• 通讯作者: 多賀谷悦子

Analysis of the diagnosis of Japanese patients with primary ciliary dyskinesia using a conditional reprogramming culture

使用条件重编程培养分析日本原发性纤毛运动障碍患者的诊断

• DOI: 10.1016/j.resinv.2022.02.003
• 发表时间: 2022
• 期刊: Respiratory Investigation
• 影响因子: 3.1
• 作者: Kurokawa Atsushi;Kondo Mitsuko;Honda Nahoko;Orimo Mami;Miyoshi Azusa;Kobayashi Fumi;Abe Kazuhiro;Akaba Tomohiro;Tsuji Mayoko;Arimura Ken;Nakatani Kaname;Ikejiri Makoto;Yagi Osamitsu;Takeyama Kiyoshi;Katsura Hideki;Takeuchi Kazuhiko;Tagaya Etsuko
• 通讯作者: Tagaya Etsuko

線毛機能不全症候群の診療の手引き

纤毛功能障碍综合征的治疗指南

• DOI: 10.7248/jjrhi.62.1
• 发表时间: 2023
• 期刊: Nihon Bika Gakkai Kaishi (Japanese Journal of Rhinology)
• 作者: Yifei Xu;Guofei Feng;Taichi Yano;Sawako Masuda;Mizuho Nagao;Shimpei Gotoh;Makoto Ikejiri;Masaki Tanabe;Kazuhiko Takeuchi;線毛機能不全症候群の診療の手引き作成委員会
• 通讯作者: 線毛機能不全症候群の診療の手引き作成委員会