線維芽細胞・マクロファージの相互作用に着目した肺線維化の病態解明

阐明肺纤维化的病理学，重点关注成纤维细胞和巨噬细胞之间的相互作用

• 批准号: 22K08277
• 负责人: 齋藤 朗
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08277/
• 关键词: 線維芽細胞; マクロファージ; 気管支上皮細胞; 肺胞上皮細胞; 初代培養; RNAシーケンス; 肺線維症; トランスクリプトーム

肺移植を受けた患者由来の切除肺組織の解析を通じて肺線維化の分子メカニズムの解明を目指すこととした。研究倫理審査の承認および呼吸器外科の協力を得ることができ、臨床検体の収集・保管・解析のフローが構築されている。病理学的診断や画像所見などの臨床情報と統合して解析を進めることができ、臨床的関連性の高い研究を展開することが可能となっている。同一患者の切除肺組織から、線維化の強い部位と正常に近い部位を採取し、RNA-seqによる網羅的遺伝子発現解析を行ったところ、コラーゲンなどの細胞外基質やプロテアーゼの発現レベルの違いが確認できた。線維化の病態との関連が推測される、新規性の高い分子を絞り込み、その機能解析を進めている。対象とする分子の肺組織内での発現の局在や発現量の違いについては、免疫組織化学染色やRNA in situ hybridizationを活用して検討している。同一患者から複数の初代培養肺線維芽細胞を樹立して比較検討したところ、線維化の強い部位に由来する細胞では、コラーゲンゲル収縮能が高いことが確認できた。サイトカイン刺激に対するシグナル応答性などの違いも明らかになっている。個体差による結果の変動を想定して、複数の患者由来の検体を活用して解析を進めている。肺線維化におけるマクロファージの関与については、ブレオマイシン誘導性の肺線維症マウスモデルを活用し、マクロファージの遊走を抑制する新規薬剤の効果を検討している。マクロファージの肺組織への集積が低下することに伴い、細胞外基質の沈着や筋線維芽細胞の増生が抑制されることが明らかになった。

目的是通过分析接受肺移植的患者切除的肺组织来阐明肺纤维化的分子机制。提供了呼吸道手术的研究伦理评论与合作的批准，并且已经建立了用于收集，存储和分析的流程。可以通过与诸如病理诊断和成像发现等临床信息的临床信息集成来进行分析，从而可以开发高度临床相关的研究。我们从同一患者的切除的肺组织中收集了具有强纤维化的部位，并接近正常位置，并使用RNA-Seq进行了全面的基因表达分析，并发现细胞外基质的表达水平差异，例如胶原蛋白和蛋白酶。我们正在缩小可能与纤维化病理相关的高度新颖的分子，现在正在进行功能分析。靶分子在肺组织中表达的定位，并使用免疫组织化学染色和RNA原位杂交研究表达量的差异。当建立多个原发性培养的肺成纤维细胞并与同一患者进行比较时，可以证实，源自纤维化强的位点的细胞具有高胶原蛋白凝胶收缩力。还显示了对细胞因子刺激的信号反应性差异。假设由于个体差异而导致的结果差异，则使用来自多名患者的标本进行分析。关于巨噬细胞参与肺纤维化，我们正在研究通过利用博来霉素诱导的肺纤维化小鼠模型来抑制巨噬细胞迁移的新型药物的作用。已经发现，巨噬细胞在肺组织中的积累减少，细胞外基质沉积和肌纤维细胞增殖被抑制。