急性骨髄性白血病をターゲットとした二重標的キメラ抗原受容体T細胞の開発

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抗原消失による再発に対する解決策として二重標的CAR-T細胞の戦略が必要とされる。これまで当研究グループで開発されたCD116を標的とするGMR CAR-T細胞に加えて、もう一つの抗原認識部位を搭載したCAR-T細胞の開発を目指す。コンピューターシミュレーションによりCD123のリガンドであるIL-3変異体の分子設計を実施した。IL-3とIL-3受容体α鎖との複合体の立体構造をもとにIL-3野生型よりIL-3受容体α鎖結合の弱い変異体、同程度の変異体、強い変異体の候補を予測した。まずIL-3内のすべてのアミノ酸を1点変異させ、簡易的なエネルギーを計算し、点変異候補を見出した。さらに点変異候補から複数変異候補を選び、より精度の高いエネルギー計算を実施して、候補品を提案した。選定されたIL-3候補配列をCARプラスミドに組み込み、CD123 CARプラスミドを作製した。作製したプラスミドを用いて、健常人ドナーから採取、分離したヒト末梢血単核球(PBMCs)にエレクトロポレーションにより遺伝子導入、培養を実施して、CD123 CAR-T細胞を作製しフローサイトメトリー解析によりCD3陽性率とCAR陽性率を測定した。CD123 CAR-T細胞の抗腫瘍活性を測定するためにAML腫瘍株との共培養試験を実施した。培養3～5日後に共培養した細胞を回収しフローサイトメトリーにより腫瘍細胞数を解析したところ、培養したCD123 CAR-T細胞は優れた抗腫瘍活性を有することが明らかとなった。本研究によりAMLに対する二重標的CD123-GMR-CAR-T細胞作製のための抗原認識部位の選定に成功した。