DNAメチル化を基軸とした炎症ストレスとクローン性造血の相互的役割の解明

基于 DNA 甲基化阐明炎症应激和克隆造血的相互作用

• 批准号: 22K08460
• 负责人: 佐藤 友香
• 金额: $ 2.41万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08460/
• 关键词: クローン性造血; 炎症ストレス; DNAメチル化

JAK2変異やDNMT3Aの変異が同時に起こると強い炎症、造血幹細胞の再構築を促進させ、それにより血栓症の増加や骨髄増殖性腫瘍の進行による骨髄線維症の発症に関わる可能性が考慮される。このことが、クローン性造血と炎症性ストレスが血管リモデリング、腫瘍進展にどのように関与しているのか、その詳細についてDNMT3AとJAK2変異の視点から明らかにするために、2022年度は、培養細胞を用いたin vitroの系の作製に加えて、in vivoの系として遺伝子改変マウスの作製に着手した。in vitroの系では、好中球株HL-60に、JAK2V617F遺伝子が入ったプラスミドをトランスフェクションし、恒常的に発現する細胞の作製を試みている。いくつかのトランスフェクション試薬を用い実験を行った結果、JAK2V617F遺伝子の発現は一過性には確認されている。今後、JAK2V617F変異とDNMT3A欠失を同時に起こさせ、その影響を研究するためには、JAK2V617F遺伝子が安定的に発現する細胞を作る必要があるため、JAK2V617F遺伝子が安定的に発現する細胞の作製を進めている。また、好中球株HL-60にDNMT3AのsiRNAをトランスフェクトし、DNMT3Aのノックダウンを試みた。いくかの試薬を使って実験を行ったが、タンパク質発現、RNA発現ともに有意なノックダウンが起こらなかった。今後、他の方法によるDNMT3Aノックダウンを検討するとともに、DNMT3AR882H変異遺伝子の細胞への導入も検討している。in vivoの系では、DNMT3AR882H変異とJAK2V617F変異を反映するマウスの作製を進めた。Ert-Cre-homoマウスとJAK2V617F/WT；Dnmt3aR878H/WTマウスを交配し、JAK2V617F/WT；Dnmt3aR878H/WTマウスがほぼ完成した。次年度は、変異を導入したHL-60とJAK2V617F/WT；Dnmt3aR878H/WTマウスと用いてNETs形成と炎症性サイトカイン、凝固マーカーの関連性などを検討する予定である。

At the same time, JAK2 was tested to strengthen inflammation, hematopoietic progenitor cells to promote reactivation, and to detect thrombosis and bone reproductive disease at the same time. The possibility of bone failure was evaluated. Inflammatory hemopoiesis, inflammatory hematopoiesis, inflammatory vascular disease, progressive vascular disease, DNMT3A infection, JAK2 infection, and so on. In the year 2022, the culture cell used the in vitro system to improve the performance of the system, and the in vivo system was used to improve the performance of the cell. In vitro strain, HL-60 strain, and JAK2V617F strain were introduced into the virus, and the cells of the constant virus were found to be infected. In this connection, you will need to check the results of the test line and the JAK2V617F server to confirm that you are not having sex. From now on, the JAK2V617F will be in arrears at the same time, and it will be necessary to study the safety of the JAK2V617F, the stable of the JAK2V617F and the stable of the JAK2V617F. The strains of HL-60, DNMT3A, siRNA, and DNMT3A were tested, respectively. Please tell me that you are not aware of the situation, that you are aware of the RNA situation, and that you are interested in making sure that you have a problem. From now on, he will use the following methods: DNMT3A, DNMT3AR882H, and so on. The in vivo system, the DNMT3AR882H system, and the JAK2V617F system reflect the improvement of the system. Ert-Cre-homo