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血小板リガンドとSiglecの相互作用による好中球・単球の血栓形成促進機構の解明

阐明通过血小板配体和 Siglec 之间的相互作用促进中性粒细胞和单核细胞血栓形成的机制

基本信息

批准号：
22K08468
负责人：
秋山正志
金额：
$ 2.66万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08468/
关键词：
Siglec 好中球血小板

项目摘要

血中において高分子量のマルチマーとして存在するvon Willebrand factor (VWF)は血管損傷部位に露出したコラーゲンと血小板の双方に結合し血小板血栓形成を促進する一方、メタロプロテアーゼのADAMTS13はVWFを特異的に切断することで過剰な血栓形成を抑制している。我々は白血球の細胞膜上のシアル酸を認識する免疫受容体として同定されたSiglec-5およびSiglec-14が、VWFのみならずADAMTS13を認識しエンドサイトーシスすることを明らかにし、当該年度において論文として報告した。Siglec-5/14は好中球と単球に高発現しているが、活性化した血小板はこれら２種の白血球に結合することが知られている。我々は好中球・単球と血小板の結合時に、血小板上のSiglec-5/14リガンドが好中球のSiglec-5/14に結合することで、好中球の免疫機能に影響するのではないかと考え、リガンドの同定を目指した実験を当該年度から開始した。初めに、Siglec-14を発現させたTHP-1細胞のリガンドスクリーニングで同定されたシスリガンドをはじめとした様々な手法で同定された複数のSiglecリガンドの既存データを解析し、血小板膜上で発現しているtoll-like receptor 2 (TLR2)をリガンド候補として選択した。初めにHEK293細胞にTLR2を発現ベクターのトランスフェクションによって発現させて、Fc融合可溶性Siglec-5およびSiglec-14タンパク質への結合を免疫染色によって調べたが、結合を観察することはできなかった。そこで現在さらに探索範囲を広げて、TLR4およびPSGL-1などのリガンドへの結合を同じ手法で調べたが結合は確認できていない。

The presence of von Willebrand factor (VWF) in the blood vessel exposed at the site of vascular injury promotes platelet thrombosis, while the presence of ADAMTS13 specifically inhibits thrombosis. We report on the recognition of immune receptors on leukocyte cell membranes, including Siglec-5 and Siglec-14, and VWF and ADAMTS13. Siglec-5/14 is a highly reactive, activated platelet that binds to two types of white blood cells. When the binding of platelet and platelet, Siglec-5/14 on platelet and Siglec-5/14 binding on platelet, the immune function of platelet was affected. In addition, the toll-like receptor 2 (TLR2) was detected on the platelet membrane by the same method. TLR2 expression in HEK293 cells was initially detected by immunostaining for Fc fusion soluble Siglec-5 and Siglec-14 proteins. This is the first time that we have explored the range of TLR4 and PSGL-1, and the combination of TLR 4 and PSGL-1.