CUL5の発現抑制を介したT細胞の活性制御のメカニズム解明とその臨床応用

阐明抑制CUL5表达控制T细胞活性的机制及其临床应用

• 批准号: 22K08501
• 负责人: 寺倉 精太郎
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08501/
• 关键词: Cullin-5; E3 ubiquitine ligase; CAR-T; キメラ抗原レセプター; 遺伝子改変T細胞療法; キメラ抗原受容体遺伝子; CAR-T細胞療法; CUL5

E3 ユビキチンリガーゼであるCullin-5 (CUL5) を、我々独自のGenome wide CRISPR screeningから標的遺伝子として同定した。これまでCUL5のノックアウト (KO) の効果について、CD19CAR-T細胞で機能を検討してきた。CUL5-KO CD19CAR-Tにおいて、CUL5-KOによりインターロイキン-2およびT細胞レセプターの刺激の下流である、JAK-STAT pathwayのタンパクのリン酸化が遷延することを示した。これにより抗原刺激後の細胞増殖が遷延・増強し、T細胞レセプター刺激後のエフェクター細胞分画が増加する。この効果は免疫不全マウスにヒト由来腫瘍細胞を移植したモデルを用いた in vivo実験でも確認された。CUL5-KOを行う場合には、guide RNAとCas9タンパクを遺伝子導入するために一度電気穿孔を行う必要があるが、これにより細胞が一旦かなりの割合で死滅する。その後生き残った細胞で前述のような効果が見られるが、その効率は決してよくない。この課題に対して、short hairpin RNAを用いて電気穿孔を行わずにCUL5の働きを落とすシステム（shCUL5）を作成した。このシステムでは一度のレンチウイルスによる遺伝子導入でCARとshCUL5の両方を発現させることが可能であり、効率よく細胞を作成することできる。細胞作成効率の上昇とともに、CUL5-KOの効果も見られることを確認している。現在、shCUL5-CD19CARやshCUL5-CD37CAR, shCUL5-固形癌特異的CARなどを作成して同様の働きを示すことを確認している。

E3 Cullin-5 (CUL5) This is the first time that CUL5 has been tested for its function. CD19 CAR-T cell function is also discussed. CUL5-KO CD19CAR-T pathway, CUL5-KO pathway and T-cell pathway are shown in this paper. This is because cell proliferation after antigen stimulation is delayed and enhanced, and T cell differentiation after antigen stimulation is increased. The result is that the immune system is not complete and the tumor cells are transplanted in vivo. CUL-5-KO is introduced into the cell, guide RNA and Cas9-DNA, and the cells are killed once they are cut. The results of the above mentioned research are as follows: The problem is that short hairpin RNA can be used to make CUL 5. This system is designed to be a one-time, cost-effective way to introduce a gene into CAR and shCUL5. Cell production rate increases, CUL5-KO production rate increases, CUL Now, shCUL5-CD19 CAR and shCUL5-CD37 CAR, shCUL5-solid cancer-specific CAR have been created and confirmed.

项目成果

ポリヌクレオチド

多核苷酸

• 发表时间: 2022