Preparation of a novel recombinant human immunoglobulin effective for the treatment of severe febrile thrombocytopenia syndrome (SFTS)

SFTSはマダニ媒介性急性ウイルス感染症であるが、ネコ科動物はヒト以上に感受性が高く、致死率は60%で大量のウイルスを排泄し飼い主や獣医医療従事者等への感染症例が多数報告されてきた。ネコやヒトと比べてウサギは抗体応答が良く、DNAワクチンによる免疫では非常に高いウイルス中和抗体が誘導できる。そこで、本研究では、免疫ウサギのプラズマ細胞からSFTSウイルス中和活性のある抗体遺伝子をクローニングして感染防御能の高いクローンあるいは組合せを検索し、抗体遺伝子をヒト型化することにより治療用IgG製剤開発に資する知見を得ることを目的とする。初年度は、pCAGプラスミドにSFTSウイルスGPC遺伝子を組み込んだDNAをリポソームと混合して、ウサギ（NJW種）の皮下・筋肉内に接種して免疫応答を調べた。以前、ウサギ（日本白色種）にDNA免疫した時の免疫応答と比較してNJW種では抗体応答が1/20程度と低かった。そこでこれまでに2〜３週間間隔で7回免疫して高力可能抗体応答を誘導できるかを検討している。その結果、7回の免疫で有意な抗体上昇が認められたため、現在更に追加免疫を行っている。ウサギ（NJW種）のは、ウサギIgG可変領域のRT-PCR増幅プライマーを本種のウサギ用に開発されたのを用いるためであるが、抗体応答が追加免疫でも不十分な場合には、日本白色種IgG用のプライマーを開発して、日本白色種にDNA免疫してウサギ抗体遺伝子をクローニングする方法に切り替える予定である。

SFTSはマダニ媒介性急性ウイルス感染症であるが、ネコ科動物はヒト以上に感受性が高く、致死率は60%で大量のウイルスを排泄し飼い主や獣医医療従事者等への感染症例が多数報告されてきた。ネコやヒトと比べてウサギは抗体応答が良く、DNAワクチンによる免疫では非常に高いウイルス中和抗体が誘導できる。そこで、本研究では、免疫ウサギのプラズマ細胞からSFTSウイルス中和活性のある抗体遺伝子をクローニングして感染防御能の高いクローンあるいは組合せを検索し、抗体遺伝子をヒト型化することにより治療用IgG製剤開発に資する知見を得ることを目的とする。初年度は、pCAGプラスミドにSFTSウイルスGPC遺伝子を組み込んだDNAをリポソームと混合して、ウサギ（NJW種）の皮下・筋肉内に接種して免疫応答を調べた。以前、ウサギ（日本白色種）にDNA免疫した時の免疫応答と比較してNJW種では抗体応答が1/20程度と低かった。そこでこれまでに2〜３週間間隔で7回免疫して高力可能抗体応答を誘導できるかを検討している。その結果、7回の免疫で有意な抗体上昇が認められたため、現在更に追加免疫を行っている。ウサギ（NJW種）のは、ウサギIgG可変領域のRT-PCR増幅プライマーを本種のウサギ用に開発されたのを用いるためであるが、抗体応答が追加免疫でも不十分な場合には、日本白色種IgG用のプライマーを開発して、日本白色種にDNA免疫してウサギ抗体遺伝子をクローニングする方法に切り替える予定である。