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糖代謝異常の病態形成における2型糖尿病遺伝子UBE2E2の役割

2型糖尿病基因UBE2E2在糖代谢异常发病机制中的作用

基本信息

批准号：
22K08620
负责人：
桜井賛孝
金额：
$ 2.66万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08620/
关键词：
インスリン分泌糖尿病関連遺伝子ユビキチン膵β細胞

项目摘要

【背景と目的】近年のヒトゲノムワイド関連解析(GWAS)の結果、様々な人種・地域における2 型糖尿病の疾患感受性遺伝子が同定されている。そのような中で、2010年に日本人や東アジア人でのみ有意な2型糖尿病遺伝子としてUBE2E2が報告された。UBE2E2はユビキチン修飾系においてユビキチンのキャリアー蛋白として機能する種々のE2の中の一つであるが、その機能に関しては明らかでない点が多く、特に糖代謝制御における役割は全く不明である。そこで、発生工学的手法を用いて膵β細胞特異的UBE2E2トランスジェニックマウス(TGマウス)とUBE2E2全身ノックアウトマウス(KOマウス)を作製し、その表現型を解析することで膵β細胞や各組織でのUBE2E2の役割や、ひいてはユビキチン修飾系と糖尿病の関連を解明することを目的とした。【方法】マウス膵島のmRNA由来のcDNAをもとにUBE2E2蛋白をコードするexon2-6の領域をクローニングし、RIPプロモーター下に配置したコンストラクトを構築しTGマウスを作製した。またexon2の領域にsgRNAを設計してCRISPR-Cas9システムを用いてKOマウスを作製した。【結果】TGマウスは若週齢時よりβ細胞量の低下に伴うインスリン分泌低下の表現型を呈した。また、細胞周期関連因子のp21遺伝子の発現高値と若週齢時や高脂肪食負荷時のβ細胞の増殖能の低下も認めた。プロテアソーム阻害剤処理後のプロテオーム解析では種々のポリユビキチン鎖形成の有意な増加を認め、さらに、阻害剤あり/なしのいずれの条件のプロテオーム解析においても有意に発現増加していたE3リガーゼとしてNedd4が検出された。KOマウスに関しては、数匹のF0世代のマウスを作出した。

Background and Objective: The results of recent research on the relationship analysis (GWAS) of type 2 diabetes mellitus (T2DM) showed that the susceptibility gene of T2DM was determined by race and region. In 2010, the Japanese reported that they had type 2 diabetes mellitus. UBE2 E2 is a member of the E2 family. It is a member of the E2 family. It is a member of the E2 family. The aim of this study is to elucidate the relationship between beta cell-specific UBE2 E2 gene expression and diabetes mellitus by means of a genetic engineering approach to control and analyze the phenotype of beta cell-specific UBE 2 E2 gene expression in various tissues. [Methods] The cDNA sequence of UBE2 E2 protein was mapped to exon2 -6 domain. Exon2 domain sgRNA design and CRISPR-Cas9 system design [Results] TG levels were lower than those of the control group, and the phenotype of TG secretion was lower than that of control group. High levels of p21 gene expression and low levels of β-cell proliferation were observed during the week and at high fat load. Analysis of the conditions for the intentional increase in the formation of the multi-channel lock after the treatment of the multi-channel barrier agent; analysis of the intentional increase in the formation of the multi-channel lock after the treatment of the multi-channel barrier agent; analysis of the conditions for the intentional increase in the formation of the multi-channel lock after the treatment of the multi-channel barrier agent; analysis of the conditions for the formation of the multi-channel lock after the treatment of the multi-channel barrier agent; analysis of the conditions for the formation of the multi-channel lock after the treatment of the multi-channel barrier agent KO