NASH・肥満発症における肝細胞・肝星細胞のPin1の役割

肝细胞和肝星状细胞 Pin1 在 NASH/肥胖发展中的作用

基本信息

批准号：
22K08655
负责人：
中津祐介
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Hiroshima University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08655/
关键词：
Pin1 NASH PPAR 分子シャペロン非アルコール性脂肪性肝炎肥満ヘパトカイン

项目摘要

プロリン異性化酵素Pin1は、標的蛋白のpSer/pThr-Pro配列に結合し、プロリンのシスートランス異性化を行うことにより、その機能を調節している。本研究では、Pin1を介した非アルコール性脂肪性肝炎(NASH)発症機構を明らかにすることを目的として研究に着手し、以下のことを明らかにした。①肝細胞特異的Pin1 KOマウスを作成し、NASH誘発食である高脂肪・高コレステロール食 (HFHC)を負荷した。意外なことに、KOマウスは、体重増加がWTマウスと比較して軽度であり、これと一致して肝重量や脂肪重量もKOマウスで低値であった。②HFHC食負荷後、グルコース負荷試験やインスリン負荷試験を行い、耐糖能を検討したところ、KOマウスで良好な値を示した。また、インスリンを負荷した後、肝・筋・脂肪を摘出し、Aktのリン酸化をウエスタンブロットで測定したところ、KOマウスの肝臓は、WTと比べてAKtのリン酸化が強く認められた。一方、筋や脂肪組織では、差が認められなかった。③HFHC食負荷後に、肝臓を摘出し、組織切片を観察したところ、肝脂肪蓄積や肝線維化は、KOマウスで軽度であった。これと一致して、コラーゲン等の各種線維化マーカーは、KOマウスの肝臓で低値であった。④KOマウスで、NASH発症が抑制されるメカニズムを検討するために、体重差が認められないHFHC食負荷6週間の時点で、肝臓を摘出し、RNA-seqを行った。GO解析の結果、Pin1 KOマウスの肝臓では、PPAR経路や分子シャペロンの発現量が亢進していた。⑤293T細胞において、過剰発現系によるPin1とPPAR alphaの結合を検討したところ、両者の結合が認められた。

脯氨酸异构酶PIN1与靶蛋白的PSER/PTHR-PRO序列结合，并通过执行脯氨酸的顺式转移异构化来调节其功能。在这项研究中，我们开始研究，目的是阐明PIN1介导的非酒精性脂肪性肝炎（NASH）开发的机制，并揭示了以下内容：1）制备肝细胞特异性PIN1 KO小鼠，并充满了高脂肪，高脂，高脂肪，高胆固醇饮食（HFHC），一种Nash-diet，nash-inash-inash-inash-inash-insy dig。出乎意料的是，与WT小鼠相比，KO小鼠的体重增加较小，因此，肝脏重量和脂肪重量在KO小鼠中的值也较低。 2）在HFHC饮食负荷后，进行了葡萄糖耐量测试并检查了胰岛素耐受性，并在KO小鼠中发现了良好的值。此外，在施用胰岛素后，去除肝脏，肌肉和脂肪，通过蛋白质印迹测量Akt的磷酸化，而KO小鼠的肝脏与WT相比显示AKT的磷酸化更强。另一方面，在肌肉或脂肪组织中未观察到差异。 ③在HFHC饮食加载后，去除了肝脏并观察到组织切片，并且KO小鼠的肝脏脂肪积累和肝纤维化轻度。与此相一致，KO小鼠的肝脏中的各种纤维化标记（例如胶原蛋白）较低。 ④为了研究在KO小鼠中抑制NASH发育的机制，去除了肝脏，并在HFHC饮食加载的6周时进行RNA-Seq，在没有观察到体重差异的情况下。 GO分析表明，PIN1 KO小鼠的肝脏增加了PPAR途径和分子伴侣表达水平。 ⑤在293T细胞中，通过过表达系统检查了PIN1和PPARα之间的结合，并观察到两者之间的结合。