New treatment methods for liver failure by human iPS cells

人类iPS细胞治疗肝衰竭的新方法

• 批准号: 22K08735
• 负责人: 吉住 朋晴
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08735/
• 关键词: 人工肝臓; iPS細胞; 肝臓; ラット; 肝不全; 肝移植

肝不全に対する唯一の根治的治療である肝移植医療において、グラフト不足と肝移植後拒絶反応が解決すべき問題である。本邦では主に生体肝移植が施行されているが、グラフト容積不足によって引き起こされる過小グラフト症候群は術後生存率を大きく低下させる。患者本人の細胞からiPS肝細胞(iPS-Heps)を作成し、それを肝移植と組み合わせることで、グラフト不足や過小グラフト症候群を克服できる可能性がある。これまでにiPS細胞からiPS-Hepsを作成する方法は報告されているが、肝不全患者の救出には多量の肝細胞の培養が必要であるが、これまでにiPS-Hepsを大量培養できていない。我々は、iPS細胞から分化させた星細胞(iPS-Stellates)と共培養することで、iPS-Hepsをより分化させ、増殖させることができた。今回の目的は、iPS-Stellatesを共培養することによるiPS-Hepsを分化させ、増殖させるメカニズムを明らかにし、iPS-Hepsを大量培養させる方法を確立することである。本研究の今年度までの成果を報告する。iPS細胞より肝細胞の誘導・分化を行った。誘導したiPS由来肝細胞はヒト正常肝細胞と比較しHNFαやアルブミンに関してはほぼ同等の発現を認めた。作成したiPS由来肝細胞を免疫抑制ラットに移植し移植後60日目にラット肝を評価した。ヒト特異的アルブミンの免疫染色にて、拒絶を認めず、90％以上の細胞が陽性となり、再分布させることができた。ラットにiPS由来肝細胞を移植した90日目の肝臓をコラゲナーゼ処理することで、肝細胞を単離した。単離した肝細胞は、同様にヒト特異的アルブミンの免疫染色にて90％以上陽性細胞であり、STEM121(ヒト特異的マーカー)も同様に陽性となった。回収できた細胞は、500x106であり、移植した細胞の500倍の細胞を回収することができた。

The only cure for liver incompleteness is liver transplantation. In our country, the survival rate of liver transplantation is greatly reduced due to insufficient liver capacity. The patient's own cells, iPS hepatocytes (iPS-Heps), can be made into liver transplantation groups, and the possibility of overcoming liver transplantation syndrome is high. This paper reports a method for producing iPS-Heps from iPS cells. It is necessary to culture a large number of hepatocytes for the rescue of patients with liver insufficiency. We have developed iPS-Stellates and iPS-Heps co-culture. The aim of this study is to establish a method for co-culturing iPS-Stellates and iPS-Heps in vitro. The results of this research are reported in this paper. iPS cells are induced and differentiated into hepatocytes. Induction of iPS from hepatocytes is related to the development of the same protein as normal hepatocytes. iPS is derived from liver cells and evaluated 60 days after transplantation. More than 90% of the cells were positive and redistributed. iPS is derived from liver cells transplanted into the liver on the 90th day. More than 90% of the positive cells were isolated from liver cells, and STEM121 was also positive. 500 x 106 cells of transplanted cells