Nrf2を介したTAM-cancerクロストークによる肝癌薬剤耐性機序の解明

Nrf2介导的TAM-癌症串扰阐明肝癌耐药机制

基本信息

批准号：
22K08753
负责人：
高須千絵
金额：
$ 2.75万
依托单位：
The University of Tokushima
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08753/
关键词：
TME 癌微小環境レンバチニブ Nrf2 TAM-cancer 肝癌薬剤耐性機序肝細胞癌 HCC

项目摘要

1)　薬剤耐性肝癌・膵癌細胞株におけるNrf2の役割の解明1.レンバチニブ耐性肝癌細胞株の確立と特性の確認：肝癌細胞株(PLC, Huh7)を使用。レンバチニブを含む培地で培養し、濃度を徐々に上昇させることにより耐性株を樹立し、耐性株で親株に比し耐性、悪性度が増大している事を確認した。2.Nrf2ノックダウンによる細胞株の特性の変化に関する検討：耐性株が獲得した特性において、Nrf2 pathwayの影響を検討するために、Si-RNAによりNrf2をノックダウンした耐性株を用いて、上記耐性・悪性度上昇がキャンセルされる事を確認すた。3.レンバチニブ耐性肝癌細胞株におけるmiRNA発現に関する検討：薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium（Cancer-CM）から市販のエクソソーム回収kitを用いてmicroRNAを抽出し、Nrf2に関連するmicroRNA-Xを同定した。2) 薬剤耐性細胞株由来microRNA-XにおけるNrf2 pathwayの検討薬剤耐性肝癌細胞株(PLC, Huh7)で24hr培養によるCancer condition medium（Cancer-CM）を作成し、肝癌細胞株を作成し、耐性度・悪性度の特性につき下記検討を行い、recipient側でも耐性と悪性度が上昇している事を確認した。

1）阐明NRF2在耐药性肝癌和胰腺癌细胞系中的作用1。使用抗Lenvatinib抗肝癌细胞系的特征和确认：使用肝癌细胞系（PLC，HUH7）。通过在含有Lenvatinib的培养基中培养并逐渐增加浓度来确定抗性应变，并且与母体菌株相比，证实抗性菌株具有增加的耐药性和恶性肿瘤。 2。检查由于NRF2敲低而引起的细胞系特性的变化：为了研究NRF2途径对抗性菌株获得的特性的影响，我们证实，使用已通过SI-RNA击倒NRF2的抗性菌株取消了上述耐药性和恶性肿瘤的增加。 3。在抗lenvatinib耐药性肝癌细胞系中对miRNA的表达的检查：在抗药性肝癌细胞系（PLC，HUH7）中，在24小时培养的癌症状况培养基（CANCER-CM）中提取了microRNA，使用市售外泌体恢复KIT鉴定与NRF2相关的MicroRNA-X。 2）在24小时培养物中制备了抗药性细胞系（CANCER-CM）的MicroRNA-X中NRF2途径的检查，并制备了耐药性肝癌细胞系（PLC，HUH7），并制备了肝癌细胞系。进行了以下研究，以确定受体侧的耐药性和恶性特征，并确认抗药性和恶性肿瘤也会增加。