臨床応用を目指した痛みの遺伝子治療の基盤的研究開発

以临床应用为目标的疼痛基因治疗的基础研究和开发

• 批准号: 22K09016
• 负责人: 神田 浩嗣
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Asahikawa Medical College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09016/
• 关键词: GABA; 遺伝子治療; 神経障害性疼痛; ウイルスベクター; アデノウイルス

近年、遺伝子治療は様々な分野で注目されており、臨床応用が開始されている分野もあるが、ペインクリニックにおいては痛みの遺伝子治療は確立されていない。これまでに代表者は痛みの遺伝子治療の有用性やその鎮痛機序を解明する研究成果を継続的に報告してきた。本研究はグルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)67を発現させ脊髄後角のγ-アミノ酪酸 (GABA) 合成を促進するウイルスベクターを用いた遺伝子治療の有用性を明らかにし、そのメカニズムを解明することを目的としている。本研究は、以下の１）～３）に示す研究内容から構成されている。１）GABA産生の促進のためGAD67を導入するアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターを作成する。作成したAAVベクターには、神経細胞特異的に標的遺伝子を発現させるためのプロモーターを装備させ、神経組織でのみGABA産生が促進する機能を付加させる。２）作成したAAVベクターの機能評価を行う。機能評価には初代培養神経細胞および実験動物（ラット）を用いる。３）疼痛モデルにAAVベクターを投与して行動解析を用いて疼痛閾値を経時的に測定し、その鎮痛効果と分子生物学的機序を調べる。2022年度の研究実績：１）の研究を行った。その方法と共にその結果を次に示す。緑色蛍光タンパク質（GFP）をサイトメガロウイルス（CMV）またはシナプシンI （SYN）プロモーター制御下で発現するAAVベクターを作成した。この2種のAAVベクターをラットに髄注しPCR法及び免疫染色法を用いて脊髄における導入遺伝子の発現を調べた。PCR法においては両群でラット脊髄のGFP発現が誘導された。免疫染色法では、SYN-AAVベクター投与群でのみ神経細胞特異的なGFP発現が認められた。SYNプロモーターを持つAAVベクターはラット脊髄の神経細胞へ特異的に標的遺伝子を導入する性質を持つことが明らかになった。

In recent years, but 伝 treatment は others 々 な eset で attention さ れ て お り, clinical 応 begin with が さ れ て い る eset も あ る が, ペ イ ン ク リ ニ ッ ク に お い て は pain み の heritage 伝 son treatment は establish さ れ て い な い. Representatives こ れ ま で に は pain み の heritage 伝 son treatment の usefulness や そ の analgesia machine sequence を interpret す る research を 継 続 に report し て き た. This study は グ ル タ ミ ン acid デ カ ル ボ キ シ ラ ー ゼ (GAD) 67 を 発 now さ せ Angle after spinal marrow の gamma ア ミ ノ butyric acid (GABA) synthetic を promote す る ウ イ ル ス ベ ク タ ー を with い た heritage 伝 son treatment の usefulness を Ming ら か に し, そ の メ カ ニ ズ ム を interpret す る こ と を purpose と し て い る. This study に, and the following に 1) to 3) に show that the す research content ら ら constitutes されて る る る. 1) GABA production の stimulates の た め GAD67 を import す る ア デ ノ with accompanying ウ イ ル ス (AAV) ベ ク タ ー を made す る. Consummate し た AAV ベ ク タ ー に は, god 経 に mark of cell specific 伝 son を 発 now さ せ る た め の プ ロ モ ー タ ー を equipment さ せ, god 経 で の み GABA production が stimulates す る function を plus さ せ る. 2) Make た たAAVベ タ タ タ <s:1> <s:1> function evaluation 価を line う. Functional evaluation: 価に 価に primary culture of economic cells および experimental animals (ラット) を for る る. 3) pain モ デ ル に AAV ベ ク タ ー を cast with し て action parsing を with い て on pain threshold numerical を 経 に determination し, そ の analgesia working fruit と molecular machine sequence を adjusting べ る. 2022 annual <s:1> research achievements: 1) <s:1> research in を industry った. The そ <s:1> method と a total of にそ <s:1> results を times に show す. Green light 蛍 タ ン パ ク mass (GFP) を サ イ ト メ ガ ロ ウ イ ル ス (CMV) ま た は シ ナ プ シ ン I (SYN) プ ロ モ ー タ ー under the system of imperial で 発 now す る AAV ベ ク タ ー を made し た. こ の two の AAV ベ ク タ ー を ラ ッ ト に marrow injection し PCR method and び immune staining を with い て spinal marrow に お け る import legacy 伝 son の 発 now を adjustable べ た. PCR method: にお にお て て GFP occurrence in the でラット spinal cord of the taryota が induction された. Immunostaining methods で で, SYN-AAVベ <s:1> タ タ and タ were transfused with the specific なGFP of the population で <s:1> み and み, and が recognition められた occurred. SYN プ ロ モ ー タ ー を hold つ AAV ベ ク タ ー は ラ ッ ト spinal marrow の god 経 cells へ に mark of specific 伝 son を import す る nature を hold つ こ と が Ming ら か に な っ た.

项目成果

神経細胞特異的に標的遺伝子を発現させるアデノ随伴ウイルスベクターの機能評価

在神经细胞中特异性表达靶基因的腺相关病毒载体的功能评估

• 发表时间: 2022
• 作者: 佐藤遥;神田恵;川田大輔;神田浩嗣
• 通讯作者: 神田浩嗣