臨床応用を目指した痛みの遺伝子治療の基盤的研究開発

点击翻译按钮获取中文摘要

近年、遺伝子治療は様々な分野で注目されており、臨床応用が開始されている分野もあるが、ペインクリニックにおいては痛みの遺伝子治療は確立されていない。これまでに代表者は痛みの遺伝子治療の有用性やその鎮痛機序を解明する研究成果を継続的に報告してきた。本研究はグルタミン酸デカルボキシラーゼ(GAD)67を発現させ脊髄後角のγ-アミノ酪酸 (GABA) 合成を促進するウイルスベクターを用いた遺伝子治療の有用性を明らかにし、そのメカニズムを解明することを目的としている。本研究は、以下の１）～３）に示す研究内容から構成されている。１）GABA産生の促進のためGAD67を導入するアデノ随伴ウイルス（AAV）ベクターを作成する。作成したAAVベクターには、神経細胞特異的に標的遺伝子を発現させるためのプロモーターを装備させ、神経組織でのみGABA産生が促進する機能を付加させる。２）作成したAAVベクターの機能評価を行う。機能評価には初代培養神経細胞および実験動物（ラット）を用いる。３）疼痛モデルにAAVベクターを投与して行動解析を用いて疼痛閾値を経時的に測定し、その鎮痛効果と分子生物学的機序を調べる。2022年度の研究実績：１）の研究を行った。その方法と共にその結果を次に示す。緑色蛍光タンパク質（GFP）をサイトメガロウイルス（CMV）またはシナプシンI （SYN）プロモーター制御下で発現するAAVベクターを作成した。この2種のAAVベクターをラットに髄注しPCR法及び免疫染色法を用いて脊髄における導入遺伝子の発現を調べた。PCR法においては両群でラット脊髄のGFP発現が誘導された。免疫染色法では、SYN-AAVベクター投与群でのみ神経細胞特異的なGFP発現が認められた。SYNプロモーターを持つAAVベクターはラット脊髄の神経細胞へ特異的に標的遺伝子を導入する性質を持つことが明らかになった。