新規原因遺伝子に対する悪性高熱症の機能解析実験系の確立
新致病基因恶性高热功能分析实验体系的建立
基本信息
- 批准号:22K09070
- 负责人:
- 金额:$ 2.66万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
- 财政年份:2022
- 资助国家:日本
- 起止时间:2022-04-01 至 2025-03-31
- 项目状态:未结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
悪性高熱症の原因の一つとして、リアノジン受容体の遺伝子変異が指摘されてきた。近年、リアノジン受容体以外の遺伝子が悪性高熱症の原因となっている可能性が指摘されている。現在標準的に行われている悪性高熱症の機能解析の方法では、リアノジン受容体の遺伝子変異の機能解析は可能であるが、その他の遺伝子の機能解析を行なうことはできない。本研究では、リアノジン受容体以外から発見された遺伝子変異が悪性高熱症の原因であるか否かを確認するための、ノックインマウスを用いた機能解析実験系を確立する。ヨーロッパ悪性高熱症グループのガイドラインには、原因となる遺伝子変異は、リアノジン受容体 (RYR1) の遺伝子変異とジヒドロピリジン受容体 (DHPR)の遺伝子変異が報告されている。現在、RYR1の遺伝子変異48か所、DHPR (CACNA1S) の遺伝子変異2か所が認定されている。CACNA1SのDNA 配列情報を認識するgRNA を設計する。設計はCRISPR Design Toolを用いておこなった。Cas9は、T7 プロモーター下Cas9 発現プラスミドを用いてCas9 mRNA を合成、ドナーDNA には、一本鎖オリゴヌクレオチ (ssDNA) もしくはDNA プラスミドを使用した。トランスフェクション溶液は、50-100 μg/mL Cas9mRNA、25-50 μg/mL gRNAおよび25-50 μg/mL ssDNAになるようRNase free waterで調製、このプラスミドを用いて、CACN1Sの悪性高熱症原因遺伝子変異(S879P)を持ったノックインマウスの受精卵を作成依頼し、ノックインマウスを作成することができたため、これを繁殖させることで今後の悪性高熱症発症実験などに利用することが可能となった。
The cause of sexual hyperthermia is often attributed to different factors. In recent years, the cause and possibility of high fever caused by transmission outside the receptor have been criticized. Now the standard method of functional analysis of high fever is to analyze the function of different receptors and to analyze the function of other receptors. This study was conducted to identify the causes of hyperthermia in the absence of receptors and to establish a functional analysis system. The reason for the occurrence of this disease is that there is a difference in the transmission of the receptor (RYR1) and a difference in the transmission of the receptor (DHPR). Now, RYR 1 has 48 different genes, DHPR (CACNA 1 S) has 2 different genes. CACNA1S DNA alignment information is recognized by gRNA design. Design CRISPR Design Tool Cas9 mRNA synthesis, DNA sequencing, and DNA sequencing are used in Cas9 gene sequencing. Cas9 mRNA 50 - 100 μ g/mL, gRNA 25 - 50 μ g/mL, ssDNA 25 - 50 μ g/mL, RNase free water 25 - 50 μ g/mL, cas9 mRNA 25 - 50 μ g/mL, cas9 mRNA This is the first time that we've had sex.
项目成果
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科研奖励数量(0)
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