Adipose tissue-derived mesenchymal stem cells and mesenchymal stem cells-derived exosome for treatment of rat ischemic stroke.

脂肪组织来源的间充质干细胞和间充质干细胞来源的外泌体用于治疗大鼠缺血性中风。

• 批准号: 22K09214
• 负责人: 中瀬 裕之
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Nara Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09214/
• 关键词: Mesenchymal stem cells; Ischemic stroke; exosome

全身麻酔を施したウイスターラット（他家）の腹腔から採取した脂肪組織をハイドロキシアパタイト処理した不織布(ポリエチレンポリプロピレン等の高分子素材）を分離用基材として使用し、脂肪組織をトラップ、自己血清を添加して脂肪組織由来幹細胞（ADSC）が分離・培養できた。2週間の培養を継続し、不織布に付着して増殖する細胞の確認とともに、トリプシン処理した細胞をプラスチックフラスコに移行し、培養を継続できた。不織布に付着している脂肪組織は再度培養系に戻すこともできた。集密的に細胞が増殖すするのを確認後、継代によって拡大培養を行い、目的数の１億個の細胞を得ることができた。無血清培地で48時間培養した ADSC の培養上清を 2000×gで遠沈、フィルター濾過したサンプルを100,000×g,70分で超遠心し、エクソソームを洗浄、回収できた。Two-vein occlusion model作成は、申請者らが確立した方法に準じて行い、ラット脳表に隣接する2本の静脈を照射し、静脈血栓を作成した。脳皮質静脈閉塞処理の24時間後、2週間後にラットADSCを尾静脈より投与した。運動麻痺の評価を行った後、静脈閉塞処置の6週間後に、ラットを sacrifice し、病理学的解析を行った。ラット脳組織は前頭皮質の冠状断で、閉塞した2本の静脈が入るように 5mm 間隔の切片を作成し、H.E. 染色で全体像を観察した後、グリア細胞を GFAP、神経幹細胞，神経前駆細胞マーカーの doublecortin、神経細胞マーカー neurofilament、NeuN、血管内皮は RECA－1、血管周皮を PDGFR-β 抗体を用いる免疫組織染色、髄鞘の評価はトルイジンブルー染色を用いて、梗塞巣及び周辺部微小環境の病態、神経幹細胞や神経前駆細胞の遊走、血管再生の有無などを検索した。

Systemic hemp 酔 を shi し た ウ イ ス タ ー ラ ッ ト (his home) の abdominal か ら take し た adipose tissue を ハ イ ド ロ キ シ ア パ タ イ ト 処 Richard し た nonwoven fabric (ポ リ エ チ レ ン ポ リ プ ロ ピ レ ン の polymer material) を separation with base material と し て use し, adipose tissue を ト ラ ッ プ, their serum を add し て adipose tissue origin of stem cells (ADSC Youdaoplaceholder0 isolation · culture で た た. の between 2 weeks training を 継 続 し nonwoven, pay the し に て raised colonization す る cells の confirm と と も に, ト リ プ シ ン 処 Richard し た cells を プ ラ ス チ ッ ク フ ラ ス コ に transitional し, cultivating を 継 続 で き た. Non-woven fabric に is attached to the に て る る adipose tissue <e:1> re-culture line に戻す で と で で た た. Set of cells に が raised colonization す す る の を confirmed, 継 に よ っ て company large training line を い number, purpose の 100 million の cells を must る こ と が で き た. Serum-free culture で 48 time training し た ADSC の culture supernatant を で far shen, 2000 x g フ ィ ル タ ー filtration し た サ ン プ ル を 100000 x g, 70 で buzzer-beaters し, エ ク ソ ソ ー ム を, back at 収 で き た. Two - vein occlusion model make は, applicants ら が establish し た methods に じ て い, ラ ッ ト 脳 table に 隣 meet す る 2 this を irradiation し の vein and vein thrombosis を made し た. 24 hours after the treatment of the 脳 cortical vein occlusion, and 2 weeks later, にラットADSCを tail vein よ is injected into the た. After 価を rows of った in the evaluation of motor paralysis, 6 weeks after <s:1> placement of venous occlusion, に, ラットを sacrifice った, pathological analysis を rows of った. ラ ッ ト 脳 organization は ahead of cortical の coronary で breaking, block し た 2 this が の vein into the る よ う に 5 mm intervals の を し consummate, H.E slice. After staining the で whole image を観 and examining the た, グリア cells を GFAP, and neural stem cells neurofilament, NeuN, vascular endothelium <s:1> RECA-1, perivascular skin を PDGFR-β Antibody を with い る immunohistochemical staining, marrow sheath の 価 は ト ル イ ジ ン ブ ル ー dyeing を with い て, infarction 巣 and び weeks 辺 tiny environment の morbid, god 経 stem cells before や god 経 駆 の wandering and angiogenesis の whether な ど を 検 cable し た.

项目成果

脳卒中にならないために

为了避免中风

• 发表时间: 2022
• 作者: Furuta Takanori;Nakagawa Ichiro;Yokoyama Shohei;Morisaki Yudai;Saito Yasuhiko;Nakase Hiroyuki;中瀬裕之
• 通讯作者: 中瀬裕之