くも膜下出血に対する大脳オルガノイドの経動脈的投与による再生法の開発

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びまん性脳損傷をきたすくも膜下出血の治療は動脈瘤の再破裂予防や急性期の血管攣縮予防、全身状態管理などしか出来ることはなく、慢性期においてもリハビリテーションを行い、残存する脳機能を活性化する方法しかないのが現状である。本研究においては大脳オルガノイド並びに内側神経節隆起オルガノイドを用いて作成した未分化な微小スフェロイドを頸動脈的に投与することで大脳全体へと移植細胞を運搬し生着させることで脳機能を回復させることを目指している。本年度はiPS細胞（201B7株・409B2株）から大脳オルガノイドの安定的に作成することから開始した。大脳オルガノイドの作成方法は確立できたため、微小スフェロイドの作成方法の実験を開始した。まずは細胞剥離用酵素（Accutase）を用いて70日間培養した大脳オルガノイドを単細胞にまで分離し、その単細胞自体を接着培養することで生着できるのかを確認したところ、生着が確認でき、神経細胞に分化していることが確認できた、続けて、単離した細胞を96 well plateを用いて再凝集を行ったところ微小な細胞塊を形成した。大きさとしては1400マイクロメートルほどであり頸動脈的な投与を行うには大きくて不適と考えられたためさらなる大きさの調整は必要と考えられた。微小スフェロイドの免疫染色をすると神経への分化は確認できた。今後は凝集させる細胞数の調整を行い、頸動脈投与に適した大きさのスフェロイドの作成を行わないといけないと考えられる。