骨変性部位の目印「dig-hereシグナル」を認識する破骨細胞特異的受容体の探索

寻找破骨细胞特异性受体，识别标记骨退化部位的“挖掘信号”

• 批准号: 22K09305
• 负责人: 藤田 洋史
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09305/
• 关键词: 破骨細胞; ゲノム編集; Dig-hereシグナル受容体; 変性骨

私たちは、変性した骨組織を除去する機構を明らかにするために、破骨細胞が変性骨を認識する受容体を持っていると仮説をたてた。本年度は、この仮説をin vivoで立証するために、候補受容体のノックアウトマウスの作製を試行した。そして、複数ある候補受容体のうちの２つの受容体についてシングルノックアウトマウスとダブルノックアウトマウスの樹立に成功した（C57BL/6マウスバックグラウンド）。また、これらのシングルマウス系統より骨髄を採取し、骨髄マクロファージを誘導後、破骨細胞の分化を誘導した結果、１つの系統において分化が強く促進された。加えて、ダブルノックアウトマウスの骨髄マクロファージからの破骨細胞分化についても、分化が強く促進された。一方、ダブルノックアウトマウスのマイクロCTを用いた骨形態解析の予備実験では、8週齢の時点で、顕著な影響は認められなかった。このことから候補受容体のうちの少なくとも一つは、in vitroにおいて、破骨細胞の分化を抑制している分子であることが示唆された。現在、変性した骨組織の認識に関与しているかどうかin vivo解析を進めている。

我们假设破骨细胞具有识别退化骨骼以揭示去除退化骨骼的机制的受体。今年，我们试图生成候选受体的基因敲除小鼠，以在体内建立这一假设。然后，我们成功地建立了两个多个候选受体（C57BL/6小鼠背景）的单个敲除小鼠和双基因敲除小鼠。此外，从这些单一小鼠菌株中收集骨髓，并诱导骨髓巨噬细胞，并诱导破骨细胞分化，从而导致一种菌株的强烈分化。另外，在双基因敲除小鼠中与骨髓巨噬细胞的破骨细胞分化也得到了强有力的促进。另一方面，在双敲除小鼠中使用Microct进行骨形态分析的初步实验中，在8周龄时未观察到显着影响。这表明至少一种候选受体是一种抑制体外破骨细胞分化的分子。目前，正在进行体内分析，以确定其是否参与识别退化的骨组织。

项目成果

CRISPR-Cas9を用いたC-type lectin receptor多重変異マウスの作製の試み-破骨細胞分化における分子機能解明を目指して-

尝试使用CRISPR-Cas9创建C型凝集素受体多突变小鼠 - 旨在阐明破骨细胞分化中的分子功能 -

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤田洋史,田井雄馬,上田悠都;大内淑代
• 通讯作者: 大内淑代

グルタチオンによる破骨細胞形成促進にシステイニルロイコトリエン受容体CysLTR1は関与しない

半胱氨酰白三烯受体 CysLTR1 不参与谷胱甘肽促进破骨细胞形成

• 发表时间: 2022
• 作者: 藤田洋史;土生田宗憲;服部高子;久保田聡;大内淑代
• 通讯作者: 大内淑代