新規メカノストレス因子による筋疾患への治療介入およびQOL維持への貢献

使用新型机械应力因子对肌肉疾病的治疗干预和维持生活质量做出贡献

基本信息

批准号：
22K09391
负责人：
山崎悟
金额：
$ 2.75万
依托单位：
National Cardiovascular Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

マウスAIPIDは膜貫通部位１か所の2型膜タンパク質である。生化学的解析を進める中で、細胞外領域であるC末の欠損変異体を発現させると、ミオシンATPaseであるMYK-461処理をして拍動停止した心筋細胞でもSTAT3のリン酸化がみられ、恒常活性化型の変異体であることを見出した（→C-del）。予備的な検討として、心臓以外に骨格筋組織でAIPIDの発現が特異的にみられること、および骨格筋をさらにみると、神経筋接合部(Neuro-Muscular junction: NMJ)へ特異的な局在を示すことを明らかにしてきた。そこで初年度は、上記のC-del、WT、およびGFP（Mock）をAAVウイルスベクターで発現する系を構築し、それそれを8週齢マウスにおける下肢の前脛骨筋（TA）に、～5 × 109 viral genome/マウスの濃度で、50 uLを局所導入した。その後、８週間経過観察した後、骨格筋組織（TA）を回収を行った。その結果、まず、明らかな異常は見られなかった。続いて、回収した組織よりタンパク質を抽出し、Western blot法により、それぞれのAAV導入個体における導入遺伝子の発現評価を行った。その結果、どの群においても安定に発現していることを確認した。さらに、一部については凍結切片を作製したので、まずAIPIDの免疫染色を行った。その結果、NMJの筋肉側のマーカーであるαブンガロトキシンと共局在することが示された。続いて、ヘマトキシリン・エオジン染色により組織の形態を評価すると、WTとC-delにおうて“空胞”が見られた。そこで、Gomoriトリクローム染色を行うと先ほどの空胞部分は、赤紫で染色された構造体が観察される結果となった。

小鼠AIPID是一个跨膜部位的2型膜蛋白。在生化分析期间，当表达C末端的有缺陷的突变体时，表达了肌动蛋白ATPase ATPase MYK-461的心肌细胞也表现出STAT3的磷酸化，并且被发现是稳态激活的突变体（→C-del）。初步研究表明，在心脏以外的骨骼肌组织中，艾比德表达是特异的，并且进一步检查骨骼肌表现出对神经肌肉连接（NMJ）的特定定位。因此，在第一年，建立了一个系统，该系统使用AAV病毒载体表达上述C-DEL，WT和GFP（MOCK），并在8周大的小鼠中以〜5×109个病毒素/鼠标的浓度将50 UL在下肢的胫骨前肌（TA）中局部引入。随访8周后，收集骨骼肌组织（TA）。结果，未观察到明显的异常。随后，从收集的组织中提取蛋白质，并通过Western blot方法评估每个单个AAV中转基因的表达。结果，已经确认该条件在所有组中都是稳定的。此外，某些样品是冷冻切片，并且对AIPID进行了首次免疫染色。结果表明，它与NMJ的肌肉标记物α-相信毒素共定位。随后，通过苏木精 - 欧生染色评估了组织形态，在WT和C-DEL中发现了“真空吸尘器”。因此，当执行Gomori毛状体染色时，在前面提到的液泡截面中观察到用红色紫色染色的结构。

项目成果

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Identifying antibiotics based on structural differences in the conserved allostery from mitochondrial heme-copper oxidases.

DOI：
10.1038/s41467-022-34771-y
发表时间：
2022-12-08
期刊：
NATURE COMMUNICATIONS
影响因子：
16.6
作者：
Nishida, Yuya;Yanagisawa, Sachiko;Morita, Rikuri;Shigematsu, Hideki;Shinzawa-Itoh, Kyoko;Yuki, Hitomi;Ogasawara, Satoshi;Shimuta, Ken;Iwamoto, Takashi;Nakabayashi, Chisa;Matsumura, Waka;Kato, Hisakazu;Gopalasingam, Chai;Nagao, Takemasa;Qaqorh, Tasneem;Takahashi, Yusuke;Yamazaki, Satoru;Kamiya, Katsumasa;Harada, Ryuhei;Mizuno, Nobuhiro;Takahashi, Hideyuki;Akeda, Yukihiro;Ohnishi, Makoto;Ishii, Yoshikazu;Kumasaka, Takashi;Murata, Takeshi;Muramoto, Kazumasa;Tosha, Takehiko;Shiro, Yoshitsugu;Honma, Teruki;Shigeta, Yasuteru;Kubo, Minoru;Takashima, Seiji;Shintani, Yasunori
通讯作者：
Shintani, Yasunori