常染色体優性開放隅角緑内障GLC1Dの原因遺伝子の同定

常染色体显性开角型青光眼 GLC1D 基因的鉴定

• 批准号: 16791068
• 负责人: 山崎 悟
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Keio University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16791068/
• 关键词: ヒトゲノム; ゲノムシーケンス; AARD; cDNA; 緑内障; 疾患原因遺伝子

8番染色体長椀8q23にマップされている慢性型開放隅角緑内障の原因遺伝子の同定のため、本年度は以下のことを行なった。(1)同疾患遺伝子の候補領域周辺をカバーする50Mbの塩基配列に対し、マウスやフグのゲノムシーケンスに対してドットマトリックス解析を行ない、保存領域の予測を行なった。その結果、現在までにAARDなど25個の新規遺伝子を含む285個のタンパク質をコードする遺伝子の存在を本領域に推定することができた。新規遺伝子に対してはエキソン予測から得られた配列をもとにプライマーを作成し、増幅した部分配列の塩基配列を確認した時点で発現プロファイル解析と、残された全ての予測エキソンを増幅できると考えられるプライマーの設計を行ない配列決定を試みた。非翻訳領域に関しても配列の確認できた両末端のエキソンにプライマーを設計し、配列決定を試みた。その結果、C80rfK23、C80rfK29、C80rfK32、C80rfK34、C80rfK36と名付けた5個の新規遺伝子の翻訳領域の配列をほぼ確認することができた。(2)GLC1D責任領域中には以前申請者の研究室で発見された巨大遺伝子CSMD3を含む20個の遺伝子(OXR1、STARS、ANGPT1、Mcc35555、INT6、KIAA0103、FLJ30668、TRHR、CML66、DC6、PKHDK1、EBAG9、FLJ20366、KCNV1、CSMD3、TRPS1、EIF3SC、MGC14595、RAD21、SLC30A8)が存在することを明らかにした。実際にこれらの遺伝子のコーディング領域を増幅するプライマーを設計し,PCR産物のシーケンシングによる患者DNAの変異探索を行った。しかしながら、現在までのところ原因となる変異はまだ同定できていない。

为了识别负责慢性敞开的青光眼的基因，映射到8Q23染色体8Q23的染色体，今年我们进行了以下操作：（1）对50MB碱基的基因组序列进行了DOT矩阵分析，用于50MB基本序列的基因组序列，涵盖了涵盖疾病的候选区域周围疾病的候选区域，并保存了保存的区域。结果，可以预测编码285种蛋白质的基因的存在，包括25种新型基因，例如该区域的AARD。对于新基因，基于从外显子预测获得的序列创建了引物，当确认放大部分序列的基本序列时，进行了表达谱分析，进行了表达谱分析，并且被认为能够扩增所有剩余预测的外显子的启动。引物是针对两个末端的外显子设计的，在该端子上确认了未翻译区域的序列，并尝试了测序。结果，我们几乎能够确认五个名为C80RFK23，C80RFK29，C80RFK32，C80RFK34和C80RFK36的五个新型基因的翻译区域的序列。 (2) We have revealed that 20 genes (OXR1, STARS, ANGPT1, Mcc355555, INT6, KIAA0103, FLJ30668, TRHR, CML66, DC6, PKHDK1, EBAG9, FLJ20366, KCNV1, CSMD3, TRPS1, EIF3SC, MGC14595, RAD21, SLC30A8）存在于GLC1D责任领域。实际上，设计引物是为了放大这些基因的编码区域，并且通过测序PCR产物进行了患者DNA的突变搜索。但是，迄今为止，尚未确定因果突变。