精子形成障害におけるエピゲノム因子の解明による男性不妊症に対する新規治療薬の確立

通过阐明与精子发生障碍相关的表观基因组因素，建立男性不育症的新治疗药物

• 批准号: 22K09454
• 负责人: 西尾 英紀
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09454/
• 关键词: 造精機能障害; エピゲノム; 男性不妊症; 精子幹細胞; ヒストン修飾

妊娠S-Dラットに抗アンドロゲン剤であるflutamide 7.5mgを連日腹腔内投与（妊娠14-20日）し、造精機能障害モデルである停留精巣ラットを作成した。生後9日目のラット停留精巣（UDT群）と正常精巣（Control群）で発現差を認めるヒストン脱メチル化酵素Kdm5a（lysine (K)-specific demethylase 5A）を同定した。Kdm5aは、精細管内における精細胞の支持細胞であるSertoli細胞や間質細胞であるLeydig細胞には発現を認めず、有糸期の未分化精細胞、精原細胞、精母細胞のそれぞれの核に発現を認めた。Kdm5aはヒストンH3K4の脱メチル化酵素であり、同時期における停留精巣のWestern Blotによる評価で、H3K4が低メチル化状態であった。またKdm5a強制発現ベクターを作成し、マウス精原細胞培養株であるGC-1細胞にKdm5aを遺伝子導入した。Kdm5aを強制発現させたGC-1細胞で、精子幹細胞分化に関わるEsr2、Neurog3、Pou5fl、Ret、Thy1の有意な発現を認めた。さらにKdm5aに制御される遺伝子の網羅的な探索のため、Kdm5aを遺伝子導入したGC-1細胞を用いてマイクロアレイ解析を行った。その候補遺伝子の中でエピジェネティックに発現制御される遺伝子に着目し、それらの遺伝子のKdm5aによるメチル化状態の変化について、ヒストンH3K4抗体を用いてChIP-qPCR assayで検討した。ChIP-qPCR assayで、GC-1細胞においてKdm5aを強制発現しても、Tet1遺伝子のメチル化状態の変化を認めなったが、Scml2については、H3K4me3で発現亢進を認めた。

Pregnancy S-D ラットにanti-アンドロゲン剤であるflutamide 7.5mg is administered intraperitoneally on consecutive days (14th to 20th day of pregnancy), and it is used to prepare spermatozoa with sperm production impairment. On the 9th day after birth, the remaining sperm (UDT group) and the normal sperm (Control group) are different and the difference is recognized by the lysine (K)-specific demethylase Kdm5a (lysine (K)-specific demethylase). 5A) を同定した. Kdm5a, sperm cells, supporting cells, sertoli cells, and interstitial cells in the seminiferous tubules, Leyd Ig cells are recognized as they appear, and undifferentiated sperm cells, spermatogonia, and spermatocytes in the fertilization stage are recognized as nuclei. Kdm5a はヒストンH3K4の出メチル化zyme であり、Same period におけるstay sperm 巣のWestern Blot's review, H3K4's low maintenance status. Kdm5a was forced to be produced, and Kdm5a was introduced into the spermatogonia culture strain GC-1 cells. Kdm5a forces the development of GC-1 cells and the differentiation of sperm stem cells, Esr2, Neurog3, Pou5fl, Ret, and Thy1. kdm5 The acetate was introduced into GC-1 cells and analyzed using the いてマイクロアレイ.その candidate addendum 伝子の中でエピジェネティックに発出入煕れる伝子に出目し、それらの缝子のK dm5a H3K4 Antibody ChIP-qPCR Assay is done. ChIP-qPCR assayで、GC-1 cellsにおいてKdm5aをforced appearanceしても、Tet1 缝子のメチルChange status of Scml2, H3K4me3, and H3K4me3.

项目成果

Low Serum Inhibin B/Follicle-Stimulating Hormones and Anti-Mullerian Hormone/Follicle-Stimulating Hormones Ratios as Markers of Decreased Germ Cells in Infants with Bilateral Cryptorchidism

低血清抑制素 B/卵泡刺激激素和抗苗勒氏管激素/卵泡刺激激素比率作为双侧隐睾婴儿生殖细胞减少的标志

• DOI: 10.1097/ju.0000000000002344
• 发表时间: 2021
• 期刊: J Urology
• 影响因子: 6.6
• 作者: Kato T;Mizuno K;Matsumoto D;Nishio H;Nakane A;Kurokawa S;Kamisawa H;Maruyama T;Iwatsuki S;Umemoto Y;Yasui T;Hayashi Y
• 通讯作者: Hayashi Y