子宮体癌におけるFBXW7-AURKA経路を標的とした新規治療法の開発

开发针对子宫内膜癌 FBXW7-AURKA 通路的新疗法

• 批准号: 22K09598
• 负责人: 渡辺 尚文
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Fukushima Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09598/
• 关键词: 子宮体癌; FBXW７; AURKA; 脈管侵襲; FBWX7; 新規治療法

子宮体癌の脈管侵襲は再発高リスクであり、そのメカニズムを明らかすることは新規治療法の開発へ応用できる。本研究では、(1)臨床検体における子宮体癌の脈管侵襲と有意に相関したFBWX7変異が、AURKA蛋白質の異常蓄積で脈管侵襲形成を促進する、(2)子宮体癌治療の臨床応用にむけて、FBXW7変異によるAURKA蛋白質の蓄積に対し、既存のAURKA阻害剤が脈管侵襲を抑制することの解明を目的とした。1.子宮体癌の手術検体を用いて、FBXW7変異に伴う発現低下とAURKAの発現亢進を免疫染色で検証する。2. FBXW7変異のない子宮体癌細胞株（野性株：WT）にFBXW7が組み込まれたshRNA発現プラスミドベクターを遺伝子導入し、FBXW7の発現を抑制したFBXW7(KO)細胞株を樹立する。3.FBXW7(WT)とFBXW7(KO)それぞれの細胞株にAURKA遺伝子を導入し、AURKA過剰発現細胞株FBXW7(WT/AURKA)とFBXW7(KO/AURKA)を樹立する。4. FBXW7(WT)、FBXW7(KO)、FBXW7(WT/AURKA)、FBXW7(KO/AURKA)の4種の細胞株を用いて、MTT assayによる増殖能、wound healing assayやtranswell assayにより離脱・運動能、invasion assayにより浸潤能を、血管内皮細胞透過性のassayで血管内皮への遊走能をそれぞれ評価する。5.樹立した4種の細胞株をSCIDマウスの皮下へ移植し、腫瘍増殖能、血管新生能の評価を行う。皮下腫瘍移植後に転移を認めた場合、転移の有無や個数を計測し、転移能の評価を行う。6.上記4、5のassay系においてそれぞれAURKA阻害薬を投与し、脈管侵襲能の抑制、腫瘍縮小及び転移抑制の効果があるか否かを検討する。

Uterine body cancer vascular invasion is a high risk factor, and the development of new treatment methods. This study aims to: (1) clarify the relationship between FBWX7 expression and vascular invasion in uterine cancer and the promotion of vascular invasion by abnormal accumulation of AURKA protein; and (2) clarify the relationship between FBWX7 expression and accumulation of AURKA protein and the inhibition of vascular invasion by existing AURKA inhibitors in uterine cancer therapy. 1. Uterine cancer surgery, FBXW7 abnormal with low detection, AURKA hyper-detection, immunostaining evidence 2. FBXW7 gene expression was inhibited by gene introduction into FBXW7 mutant uterine carcinoma cell line (wild strain: WT), and FBXW7 (KO) cell line was established. 3. Introduce the AURKA gene into the FBXW7 (WT) and FBXW7 (KO) cell lines, and establish the AURKA expressing cell lines FBXW7 (WT/AURKA) and FBXW7 (KO/AURKA). 4. FBXW7 (WT), FBXW7 (KO), FBXW7 (WT/AURKA), FBXW7 (KO/AURKA) four cell lines were used in MTT assay, proliferation ability, wound healing assay, transwell assay, isolation, exercise ability, invasion assay, vascular endothelial cell permeability assay, vascular endothelial migration ability. 5. 4 SCID cell lines were established for subcutaneous transplantation, tumor proliferation and angiogenesis evaluation. After subcutaneous tumor transplantation, the number of patients with or without metastasis was measured, and the migration ability was evaluated. 6. The above assays 4 and 5 are related to the effects of AURKA inhibitor, vascular invasion inhibition, tumor reduction and migration inhibition.