エストロゲン受容体α（ERα）によるがん幹細胞サイズを制御する分子機序の解明

本研究は子宮内膜癌細胞において、局在の異なるエストロゲン受容体α（estrogen receptor α, ERα）ががん幹細胞サイズを制御する分子機序の解析を目的としている。研究代表者は、ERαを発現していない子宮内膜癌細胞株（Ishikawa株）にERα強制発現ベクターを恒久的に導入することによって、①細胞膜（細胞膜型ERα）、②細胞質と細胞核（細胞質核型ERα）、③細胞核（細胞核型ERα）、④EREに結合しない細胞膜・質・核（近野生型ERα）、およびEREに結合する細胞膜・質・核（野生型ERα）に、それぞれERαを発現する細胞株を作成した。当該年度は、細胞質核型ERαを持つ細胞株における、エストロゲン(E2)および、選択的エストロゲン受容体モジュレーターであるタモキシフェン（Tam）、フルベストラント（Fulvestrant or ICI）、あるいはバゼドキシフェン（BDF）を添加し、細胞の増殖能、遊走能ならびに各種シグナルパスウェイ上のタンパク質の発現量およびリン酸化レベルについて解析を行った。細胞質核型ERα細胞では、E2添加により細胞の増殖能と遊走能は亢進し、逆にTamならびにBDF添加により細胞の増殖能が抑制されることが確認された。しかし、ICI添加によるこれらの変化は認められなかった。一方、ERα-細胞において、E2やICIまたBDF添加によるこれらの変化は認められなかった。さらに、増殖能および遊走能に関わるシグナルパスウェイ上のタンパク質の発現量およびリン酸化レベルをウエスタンブロット法によって解析した。細胞質核型ERα細胞とERα-細胞において、非リン酸化mTORの発現量に変化は見られなかった。しかし、細胞質核型ERα細胞においてE2添加により、リン酸化mTOR（Ser2448）の発現量の増加や、リン酸化FAK（Try297）の発現量の低下が認められた。以上の結果より、細胞質と核内に局在するERαを介したリン酸化ｍTORの発現量の増加が、細胞の増殖と遊走の亢進に関与すると考えられる。

本研究は子宮内膜癌細胞において、局在の異なるエストロゲン受容体α（estrogen receptor α, ERα）ががん幹細胞サイズを制御する分子機序の解析を目的としている。研究代表者は、ERαを発現していない子宮内膜癌細胞株（Ishikawa株）にERα強制発現ベクターを恒久的に導入することによって、①細胞膜（細胞膜型ERα）、②細胞質と細胞核（細胞質核型ERα）、③細胞核（細胞核型ERα）、④EREに結合しない細胞膜・質・核（近野生型ERα）、およびEREに結合する細胞膜・質・核（野生型ERα）に、それぞれERαを発現する細胞株を作成した。当該年度は、細胞質核型ERαを持つ細胞株における、エストロゲン(E2)および、選択的エストロゲン受容体モジュレーターであるタモキシフェン（Tam）、フルベストラント（Fulvestrant or ICI）、あるいはバゼドキシフェン（BDF）を添加し、細胞の増殖能、遊走能ならびに各種シグナルパスウェイ上のタンパク質の発現量およびリン酸化レベルについて解析を行った。細胞質核型ERα細胞では、E2添加により細胞の増殖能と遊走能は亢進し、逆にTamならびにBDF添加により細胞の増殖能が抑制されることが確認された。しかし、ICI添加によるこれらの変化は認められなかった。一方、ERα-細胞において、E2やICIまたBDF添加によるこれらの変化は認められなかった。さらに、増殖能および遊走能に関わるシグナルパスウェイ上のタンパク質の発現量およびリン酸化レベルをウエスタンブロット法によって解析した。細胞質核型ERα細胞とERα-細胞において、非リン酸化mTORの発現量に変化は見られなかった。しかし、細胞質核型ERα細胞においてE2添加により、リン酸化mTOR（Ser2448）の発現量の増加や、リン酸化FAK（Try297）の発現量の低下が認められた。以上の結果より、細胞質と核内に局在するERαを介したリン酸化ｍTORの発現量の増加が、細胞の増殖と遊走の亢進に関与すると考えられる。